-
Telefón
+86-0755 2308 4243
-
Adresa
Izba 309, Meihua Building, Taiwan Industrial Park, No. 2132 Songbai Road, Bao'an District, Shenzhen, Čína
-
E-mailom
FAQ
Aké metódy syntézy používa Biorunstar na syntézu peptidov?
RE: Biorunstar vyvinuli rôzne metodológie syntézy fázy roztoku, aby splnili požiadavky zákazníkov. Zvyčajne sa používa chémia Fmoc na pevnej fáze.
Ako posielate peptidy? Aké údaje kontroly kvality budú poskytnuté?
RE: Všetky peptidy budú odoslané spoločnosťou DHL alebo FedEx express ako v lyofilizovanom prášku v jednotlivých dobre označených liekovkách pri izbovej teplote. S výnimkou surových peptidov, ktoré budú kontrolované iba spektrometriou MALDI-MASS, sa všetky syntetické purifikované peptidy dodávajú so správou o projekte (CoA), MS dátami a HPLC dátami. budú poskytnuté dátové listy, ktoré budú obsahovať kľúčové charakteristiky, ako je peptidová sekvencia, čistota, množstvo, modifikácia, údaje o hmotnostnom spektre a údaje z HPLC.
Aký je typický čas obratu pre syntézu peptidov? Ako dlho trvá odoslanie ku mne?
RE: Náš typický čas obratu je 2-3 týždňov pre štandardný peptid s menej ako 30 aminokyselinami. Doba obratu sa líši v závislosti od dĺžky peptidu, množstva, rozpustnosti a obtiažnosti. Zvyčajne 3-5 dní na oslovenie výskumníkov v iných krajinách.
Ako dlho dokážete syntetizovať?
RE: Biorunstar má rozsiahle skúsenosti so syntézou dlhých peptidov, až do 130aa. Na rozdiel od mnohých dodávateľov peptidov, ktorí sú spokojní s výrobou peptidov pod 30 alebo 40 aa, Biorunstar má dobré skúsenosti s výrobou peptidov v rozsahu od 40 aa do 90 aa. Je ťažké syntetizovať dlhé peptidy, najmä 100 aa alebo dlhšie. Ak plánujete syntetizovať sekvenciu 130aa alebo dlhšiu, kontaktujte nás, aby sme vám poskytli službu expresie a purifikácie proteínov na mieru.
Čo ak sa počas procesu syntézy alebo čistenia objavia nejaké problémy?
RE: Každý peptid má svoje špecifické vlastnosti. Ak sa počas syntézy vyskytnú nejaké problémy, ktoré presahujú naše očakávania a nebudeme môcť váš peptid dodať včas, budeme vás čo najskôr informovať. Náhodou, že peptid nedokážeme vyrobiť, nebudú vám účtované žiadne náklady.
Forma soli TFA, forma soli acetátu alebo HCl: Akú formu si mám vybrať?
Štandardne sa peptidy syntetizujú v TFA soli. Pre experimenty súvisiace s bunkami alebo tkanivovými kultúrami by ste mali zvážiť produkciu peptidov vo forme acetátu alebo HCl soli na 98 % alebo viac, aby ste sa vyhli abnormálnym reakciám. Acetát alebo soľ HCl je možné vyžiadať za príplatok.
Aká je trvanlivosť peptidu?
RE: Peptidy sú stabilné minimálne jeden rok, ak sa skladujú lyofilizované v mrazničke. Ak sa peptidy rozpustia, životnosť sa môže skrátiť. Ak peptidy obsahujú niekoľko reaktívnych aminokyselín, ktoré môžu byť oxidované ako Trp, Met, ale najmä Cys, môže sa tiež skrátiť skladovateľnosť.
Peptid obsahuje niekoľko cysteínov, a preto môže ľahko vytvárať disulfidové väzby. Ako sa tomu vyhnem?
RE: Ak peptidová sekvencia obsahuje niekoľko cysteínov alebo iných reaktívnych aminokyselín, ktoré sa ľahko oxidujú, Biorunstar ponúka dodanie peptidu so stopami silného redukčného činidla DTT. Peptid sa dodáva s DTT iba vtedy, ak to zákazník výslovne povolí.
Ako uchovávam svoje syntetické peptidy?
RE: Väčšina lyofilizovaných peptidov bude stabilná pri izbovej teplote počas 2-3 týždňov. Pre dlhodobé skladovanie by ste mali lyofilizované peptidy skladovať pri -20 stupňoch . Je potrebné sa vyhnúť opakovaným cyklom zmrazovania a rozmrazovania. Pred otvorením nechajte zohriať na izbovú teplotu. Čas použiteľnosti peptidových roztokov je obmedzený; pripravený roztok peptidu by sa mal použiť čo najskôr.
Aká je čistota surového peptidu a odsoleného peptidu? Ako čistíte peptid? Aké sú nečistoty?
RE: Pre krátke peptidy s normálnymi sekvenciami pod 15aa je to všeobecne 40-60 % podľa HPLC pre surový stupeň; 50-70 % podľa HPLC pre odsolený stupeň. Čím dlhší je peptid, tým nižšia je čistota surového alebo odsoleného. Peptidy sa vo všeobecnosti čistia pomocou HPLC s použitím gradientu vody a acetonitrilu. Väčšina nečistôt sú fragmenty alebo delečné peptidy, neúplne chránené peptidy a zvyšková soľ a voda.
Vysvetlenie čistoty peptidu pomocou HPLC, celkový obsah peptidu a obsah cieľového peptidu.
RE: Biorunstar dodáva peptidy podľa celkovej hmotnosti lyofilizovaného prášku. Lyofilizovaný prášok obsahuje nečistoty, ako sú fragmenty alebo delečné peptidy, neúplne odchránené peptidy, TFA a zvyškovú vodu. Čistota peptidu sa meria pomocou HPLC. Je to množstvo správneho peptidu v pomere ku všetkým analytom, ktoré absorbujú pri ~214 nm (peptidová väzba absorbuje), s najväčšou pravdepodobnosťou delécie, skrátenie alebo neúplne de-chránené sekvencie atď. Čistota peptidu podľa HPLC neberie do úvahy vodu a soli ktoré sú zvyčajne prítomné vo vzorke. Celkový obsah peptidov je percento celkových peptidov prítomných v pomere ku všetkému prítomnému v lyofilizovanom peptidovom prášku. Celkový obsah peptidov sa stanoví analýzou obsahu dusíka. Cieľový obsah peptidu v lyofilizovanom peptidovom prášku možno teda uzavrieť vzorcom: Celkový obsah peptidu X Čistota peptidu podľa HPLC.
Aký je spôsob označovania fluoresceínom?
RE: FITC (Fluoresceín izotiokyanát) je aktivovaný prekurzor používaný na značenie fluoresceínom. Pre efektívne N-koncové značenie, sedematómový aminohexanoyl
medzi fluorofór (fluorosceín) a N-koniec peptidu. Tento spacer pomáha oddeliť fluorofór od miesta jeho pripojenia, čím potenciálne znižuje interakciu fluorofóru s biomolekulou, ku ktorej je konjugovaný, a robí ho dostupnejším pre sekundárne detekčné činidlá.
medzi fluorofór (fluorosceín) a N-koniec peptidu. Tento spacer pomáha oddeliť fluorofór od miesta jeho pripojenia, čím potenciálne znižuje interakciu fluorofóru s biomolekulou, ku ktorej je konjugovaný, a robí ho dostupnejším pre sekundárne detekčné činidlá.
Je možné C-terminálne značenie biotínu (alebo FITC)?
RE: Áno. C-koncové značenie biotínu (alebo FITC) sa uskutočňuje pridaním lyzínového zvyšku na C-koniec peptidu a biotín (alebo FITC) je pripojený k lyzínovému bočnému reťazcu prostredníctvom amidovej väzby. Odstráni sa kladný náboj lyzínu.
Aká je vhodná dĺžka peptidu na produkciu protilátok?
RE: Vo všeobecnosti sa odporúča 10-25 zvyškový peptid. Dlhší peptid by mohol mať viac epitopov, ale mohol by mať aj väčšiu šancu na vytvorenie stabilných sekundárnych štruktúr, ktoré nie sú natívnymi formami. Kratší peptid (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Čo je MAP?
RE: MAPS alebo Multi-antigénny peptid je rozvetvený peptid, v ktorom sú lineárne peptidové reťazce spojené na ich C-konci cez polylyzínové jadro, čím sa zväčšuje veľkosť celej molekuly. Toto sa robí, aby sa eliminovalo spojenie peptidov s KLH. Zdá sa však, že konformácia peptidov na MAP je menej flexibilná a protilátky získané pomocou MAP typicky rozpoznávajú cieľový proteín menej často ako konvenčnou konjugáciou KLH. Okrem toho sa pri výrobe MAPS nevytvára žiadny voľný peptid, čo sťažuje odstránenie protilátok zameraných na polylyzínové jadro. Purifikácia MAPS pomocou HPLC je náročná a MAPS sa poskytuje bez overenia hmotnosti kvôli svojej heterogenite a veľkej molekulovej veľkosti.
Prečo sa môj KLH-konjugovaný peptidový roztok javí zakalený?
RE: Hemocyanín KLH alebo Keyhole Limpet je veľký agregačný proteín (MW=4x105 – 1x107). Vzhľadom na jeho veľkosť a štruktúru je jeho rozpustnosť vo vode obmedzená, čo spôsobuje zakalený vzhľad. Toto neovplyvní imunogenicitu a zakalený roztok sa môže použiť na imunizáciu.
Môžete vysvetliť hmotnostné píky M+Na a M+K v MALDI spektrách?
RE: V spektre MALDI je veľmi bežné vidieť adukty Na (sodík) a K (draslík). Sodík a draslík pochádza z vody použitej v peptidových rozpúšťadlách. Dokonca aj destilovaná a deionizovaná voda obsahuje stopové množstvá iónov sodíka a draslíka, ktoré sa nikdy nedajú úplne odstrániť. Tieto sa ionizujú počas hmotnostného procesu MALDI a viažu sa na voľné karboxylové skupiny peptidu. Pretože neexistuje žiadny systém na čistenie vody, ktorý by z vody odstránil každý jeden sodíkový alebo draselný ión, pozorovanie aduktov sodíka a draslíka je občas veľmi bežné a nevyhnutné v hmotnostnej špecifikácii MALDI. To neznamená, že peptid nie je čistý, ani by sa nemal zamieňať s nesprávnou molekulovou hmotnosťou.