Peptidové aktívne farmaceutické zložky (API) získali vo farmaceutickom priemysle značnú pozornosť kvôli ich vysokej špecifickosti, nízkej toxicite a potenciálu na liečbu širokého spektra chorôb. Ako vedúci dodávateľ API peptidov sme odhodlaní poskytovať vysoko kvalitné peptidové produkty prostredníctvom pokročilých metód syntézy. V tomto blogu sa ponoríme do rôznych spôsobov, ako sú peptidové rozhrania API.
Syntéza peptidov v tuhej fáze (SPP)
Syntéza peptidových peptidov z pevnej fázy je jednou z najpoužívanejších metód na syntézu API peptidov. Tento prístup bol priekopníkom Robert Bruce Merrifield v roku 1963, ktorý revolúciu v syntéze peptidov a získal mu Nobelovu cenu v chémii v roku 1984.
Základný princíp SPP spočíva v pripojení C - koncového konca prvej aminokyseliny k nerozpustnej tuhej podpore, ako je živica. Táto živica poskytuje stabilnú platformu pre následné chemické reakcie. Aminoskupina pripojenej aminokyseliny je chránená vhodnou ochrannou skupinou, zvyčajne FMOC (9 - fluorenylmetyloxycarbonyl) alebo BOC (TERT - BUTYLOXYCARBONYL).
Akonáhle je prvá aminokyselina pripojená k živici, ochranná skupina na jej aminoskupine sa odstráni, čím sa odhalí reaktívna aminoskupina. Ďalšia aminokyselina, tiež chránená aminoskupinou, je potom spojená s voľnou aminoskupinou predtým pripojenej aminokyseliny pomocou väzbového činidla. Bežne používané väzbové reagenty zahŕňajú DIC (N, N ' - DiisopropylKarbodiimid), HBTU (O - Benzotriazol - N, N, N' - Tetrametyl - Uronium - Hexafluoro - N, N, N, N '' ' tetrametylurónový hexafluórfosfát).
Po každom kroku spojenia sú nezreagované aminoskupiny obmedzené, aby sa zabránilo tvorbe deléčných sekvencií. Zvyčajne sa to robí pomocou anhydridu octovej. Cyklus deprotekcie, spojenia a obmedzenia sa opakuje pre každú aminokyselinu v požadovanej peptidovej sekvencii.
Akonáhle je celá peptidová sekvencia zostavená na živici, peptid sa štiepi zo živicovej pomocou štiepneho koktailu. Tento koktail tiež odstraňuje všetky skupiny chrániace bočné reťazce, ktoré boli prítomné na aminokyselinách počas syntézy. Štiepený peptid sa potom čistí metódami, ako je vysoko výkonná kvapalná chromatografia (HPLC).
Syntéza roztoku - fázový peptid
Syntéza fázového peptidu je staršia metóda, ale v určitých situáciách má stále svoje výhody. V tejto metóde sa všetky reakcie uskutočňujú v roztoku a peptid nie je pripojený k pevnej podpore.
Syntéza sa začína ochranou amino a karboxylových skupín jednotlivých aminokyselín. Podobne ako v prípade SPP sa pre aminoskupinu používajú ochrana skupín ako FMOC alebo BOC a na ochranu karboxylovej skupiny sa používajú esterové skupiny.
Prvým krokom je spojenie dvoch chránených aminokyselín za vzniku dipeptidu. Toto sa dosahuje pomocou väzbového činidla, podobného ako v SPP. Po vytvorení dipeptidu sa ochranné skupiny na jednom konci dipeptidu odstránia a potom sa spájajú s inou chránenou aminokyselinou alebo dipeptidom, aby sa vytvoril dlhší peptid.
Proces sa opakuje krok - krok - krok, kým sa nezíska požadovaná peptidová sekvencia. Jednou z výziev syntézy roztoku - fázovej syntézy je čistenie medziprodukčných peptidov v každom kroku, pretože reakčná zmes obsahuje rôzne podľa produktov a nezreagovaných východiskových materiálov. Purifikácia sa zvyčajne vykonáva extrakciou, kryštalizáciou alebo chromatografiou.
Chemická ligácia
Chemická ligácia je silná metóda na syntézu veľkých peptidov alebo proteínov, ktoré je ťažké zostaviť pomocou tradičnej syntézy SPP alebo fázovej syntézy. Jednou z najznámejších metód chemickej ligácie je natívna chemická ligácia (NCL).
V NCL reaguje peptid s C - terminálnym tioesterom s iným peptidom s n -terminálnym cysteínovým zvyškom. Reakcia dochádza za miernych vodných podmienok a vedie k tvorbe natívnej peptidovej väzby medzi týmito dvoma peptidmi.
Proces zahŕňa prvú syntézu dvoch alebo viacerých peptidových segmentov pomocou SPP alebo syntézy fázy roztoku. Jeden segment sa pripravuje s c - terminálom tioester a druhý s cysteínom N -terminálu. Tieto segmenty sa potom zmiešajú vo vhodnom tlmivom roztoku a dochádza k ligácii. Po ligácii, ak je to potrebné, môže byť cysteín zvyšok ďalej modifikovaný alebo použitý ako rukoväť na ďalšie chemické reakcie.
Konvergentná syntéza
Konvergentná syntéza je stratégia, ktorá kombinuje výhody SPP a chemickej ligácie. Namiesto syntézy celej peptidovej sekvencie lineárnym spôsobom je peptid rozdelený na menšie segmenty, ktoré sa syntetizujú osobitne pomocou SPP.
Tieto segmenty sa potom ligujú spolu pomocou metód chemickej ligácie. Tento prístup znižuje počet krokov spojenia potrebných pre syntézu veľkých peptidov, čo môže zlepšiť celkový výťažok a čistotu konečného produktu. Napríklad dlhý peptid možno rozdeliť do troch alebo štyroch segmentov, z ktorých každý obsahuje 10 - 20 aminokyselín. Tieto segmenty sú syntetizované na živici, štiepené a potom ligované konvergentným spôsobom.
Príklady našich peptidových API
Ponúkame širokú škálu peptidových API vrátaneC20 - OTB - Glu (obbu) - Atbi10 - Atbu) Fotografie - o oa - oana - oe,C20 (OTBU) - Glu (OTBU)aPalmitoyl - Glu (OSU) - Otbu. Tieto peptidy sa syntetizujú pomocou vyššie opísaných pokročilých metód, ktoré zabezpečujú vysokú čistotu a kvalitu.
Kontrola kvality v syntéze API peptidov
Pri syntéze peptidových rozhraní API má nanajvýš dôležitý kontrola kvality. Máme zavedený komplexný systém kontroly kvality, aby sme zaistili, že naše výrobky spĺňajú najvyššie normy.
Po syntéze sa peptid analyzuje rôznymi technikami vrátane HPLC, hmotnostnej spektrometrie (MS) a jadrovej magnetickej rezonancie (NMR). HPLC sa používa na stanovenie čistoty peptidu, zatiaľ čo MS sa používa na potvrdenie molekulovej hmotnosti peptidu. NMR môže poskytnúť informácie o štruktúre a konformácii peptidu.
Vykonávame tiež štúdie stability, aby sme zaistili, že peptidové rozhrania API zostanú stabilné v rôznych podmienkach skladovania. To zahŕňa testovanie peptidu pri rôznych teplotách, hodnotách pH a v prítomnosti rôznych pomocných látok.
Záver
Syntéza peptidových rozhraní API je komplexný a multi -krokový proces, ktorý si vyžaduje pokročilé techniky a prísnu kontrolu kvality. Ako dodávateľ peptidov API neustále skúmame nové metódy a technológie na zlepšenie účinnosti a kvality našej syntézy. Či už ide o syntézu peptidov solídneho a fázového peptidu, syntézu roztoku - fáz, chemická ligácia alebo konvergentná syntéza, sme odhodlaní poskytovať našim zákazníkom vysokokvalitné peptidové výrobky.
Ak máte záujem o nákup našich peptidových rozhraní API alebo máte nejaké otázky týkajúce sa syntézy peptidov, neváhajte nás kontaktovať kvôli diskusiám o obstarávaní. Tešíme sa na spoluprácu s vami na uspokojení vašich potrieb API peptidov.
Odkazy
- Fields, GB, & Noble, RL (1990). Syntéza peptidov z pevnej fázy využívajúca 9 - fluorenylmetoxykarbonyl aminokyseliny. International Journal of Peptid a Protein Research, 35 (2), 161 - 214.
- Dawson, PE, Muir, TW, Clark - Lewis, I., & Kent, SBH (1994). Syntéza proteínov natívnou chemickou ligáciou. Science, 266 (5186), 776 - 779.
- Chan, WC a White, PD (2000). Syntéza peptidov FMOC tuhej fázy: praktický prístup. Oxford University Press.