Stanovenie koncentrácie katalógových peptidov je zásadným krokom pre výskumníkov aj dodávateľov v oblasti vedy o peptidoch. Ako dodávateľ katalógových peptidov chápem význam presného stanovenia koncentrácie. Zabezpečuje nielen kvalitu a spoľahlivosť našich produktov, ale poskytuje našim zákazníkom aj potrebné informácie pre ich experimenty a aplikácie. V tomto blogovom príspevku sa podelím o niektoré bežné metódy a úvahy na určenie koncentrácie katalógových peptidov.
Význam stanovenia koncentrácie
Predtým, ako sa ponoríme do metód, poďme najprv pochopiť, prečo je stanovenie koncentrácie katalógových peptidov také dôležité. Peptidy sú široko používané v rôznych oblastiach výskumu, ako je objavovanie liekov, imunológia a neuroveda. Účinnosť týchto aplikácií často závisí od presnej koncentrácie použitých peptidov. Nesprávna koncentrácia môže viesť k nekonzistentným experimentálnym výsledkom, plytvaniu zdrojmi a dokonca k nepresným záverom. Preto je nevyhnutné presne určiť koncentráciu peptidov, aby sa zabezpečila reprodukovateľnosť a spoľahlivosť výsledkov výskumu.
Bežné metódy na stanovenie koncentrácie peptidov
1. UV - viditeľná spektroskopia
UV - viditeľná spektroskopia je jednou z najčastejšie používaných metód na stanovenie koncentrácie peptidov. Táto metóda je založená na skutočnosti, že peptidy obsahujú aromatické aminokyseliny, ako je tryptofán, tyrozín a fenylalanín, ktoré absorbujú svetlo v ultrafialovej oblasti. Absorbancia roztoku peptidu pri špecifickej vlnovej dĺžke (zvyčajne 280 nm) je úmerná jeho koncentrácii.
Ak chcete použiť UV - viditeľnú spektroskopiu, musíte najskôr pripraviť roztok peptidu známej čistoty. Potom zmerajte absorbanciu roztoku pri 280 nm pomocou spektrofotometra. Koncentráciu peptidu možno vypočítať pomocou Beer-Lambertovho zákona:
[A=\varepsilon cl]
kde (A) je absorbancia, (\varepsilon) je molárny extinkčný koeficient, (c) je koncentrácia a (l) je dĺžka dráhy kyvety. Molárny extinkčný koeficient peptidu možno vypočítať na základe jeho aminokyselinovej sekvencie.
Treba však poznamenať, že táto metóda má určité obmedzenia. Napríklad, ak peptid neobsahuje aromatické aminokyseliny, alebo ak sú v roztoku iné látky, ktoré absorbujú pri 280 nm, výsledky môžu byť nepresné.
2. Analýza aminokyselín
Analýza aminokyselín je presnejšia metóda na stanovenie koncentrácie peptidov. Táto metóda zahŕňa hydrolýzu peptidu na jeho základné aminokyseliny a potom kvantifikáciu každej aminokyseliny pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) alebo iných analytických techník.
Na uskutočnenie analýzy aminokyselín sa peptid najprv hydrolyzuje v kyslom alebo zásaditom roztoku. Potom sa výsledné aminokyseliny oddelia a kvantifikujú. Koncentráciu peptidu možno vypočítať na základe množstva špecifickej aminokyseliny v peptide a jej známej stechiometrie.
Analýza aminokyselín poskytuje presnejšie výsledky ako UV - viditeľná spektroskopia, najmä pre peptidy, ktoré neobsahujú aromatické aminokyseliny. Je to však časovo náročnejšia a drahšia metóda.
3. Bradfordov test
Bradfordov test je kolorimetrická metóda na stanovenie koncentrácie proteínu a peptidu. Táto metóda je založená na väzbe farbiva Coomassie Brilliant Blue G - 250 na proteíny a peptidy. Keď sa farbivo naviaže na peptid, farba roztoku sa zmení z hnedej na modrú a možno merať absorbanciu pri 595 nm.
Na uskutočnenie Bradfordovho testu sa najskôr pripraví štandardná krivka s použitím známej koncentrácie proteínového alebo peptidového štandardu. Potom sa meria absorbancia roztoku vzorky a koncentrácia peptidu sa môže určiť porovnaním absorbancie vzorky so štandardnou krivkou.
Bradfordov test je relatívne jednoduchá a rýchla metóda, má však určité obmedzenia. Napríklad presnosť testu môže byť ovplyvnená prítomnosťou detergentov, solí a iných látok v roztoku.
Úvahy o stanovení koncentrácie peptidov
1. Čistota peptidu
Čistota peptidu je dôležitým faktorom, ktorý treba zvážiť pri určovaní jeho koncentrácie. Nečistoty v peptide môžu ovplyvniť presnosť stanovenia koncentrácie. Preto sa na stanovenie koncentrácie odporúča používať vysoko čisté peptidy. Ako katalógový dodávateľ peptidov zabezpečujeme vysokú čistotu našich peptidov prostredníctvom prísnych opatrení na kontrolu kvality.
2. Rozpustnosť peptidu
Rozpustnosť peptidu môže tiež ovplyvniť stanovenie koncentrácie. Niektoré peptidy môžu mať nízku rozpustnosť v určitých rozpúšťadlách, čo môže viesť k nepresným výsledkom. Preto je dôležité zvoliť vhodné rozpúšťadlo a zabezpečiť, aby sa peptid pred meraním jeho koncentrácie úplne rozpustil.
3. Kontaminácia
Kontaminácia môže tiež ovplyvniť presnosť stanovenia koncentrácie peptidu. Napríklad, ak je vzorka kontaminovaná inými proteínmi alebo peptidmi, výsledky môžu byť nepresné. Preto je dôležité používať čisté vybavenie a dodržiavať správne laboratórne postupy, aby sa zabránilo kontaminácii.
Príklady peptidov z nášho katalógu
V našej spoločnosti ponúkame široký sortiment katalógových peptidov vrStrescopin - príbuzný peptid, človek,TRH - potencujúci peptid, aEnterostatín (hovädzí, psí, prasací). Tieto peptidy sú starostlivo syntetizované a čistené, aby sa zabezpečila vysoká kvalita. Poskytujeme tiež podrobné informácie o koncentrácii a čistote každého peptidu, aby sme našim zákazníkom pomohli s ich výskumom.
Záver
Stanovenie koncentrácie katalógových peptidov je kritickým krokom vo výskume a aplikácii peptidov. Na stanovenie koncentrácie peptidu je k dispozícii niekoľko metód, z ktorých každá má svoje výhody a obmedzenia. Ako dodávateľ katalógových peptidov sme sa zaviazali poskytovať našim zákazníkom vysokokvalitné peptidy a presné informácie o koncentrácii. Ak máte záujem o náš katalógové peptidy alebo máte akékoľvek otázky týkajúce sa stanovenia koncentrácie peptidov, neváhajte nás kontaktovať pre ďalšiu diskusiu a obstarávanie.
Referencie
- Scopes, RK (1994). Purifikácia proteínov: princípy a prax. Springer – Verlag.
- Sapan, CV, Lundblad, RL, & Price, NC (1999). Stanovenie bielkovín v biologických materiáloch: prehľad kurzu. Biotechnology and Applied Biochemistry, 30(1), 7 - 20.
- Bradford, MM (1976). Rýchla a citlivá metóda na kvantifikáciu mikrogramových množstiev bielkovín využívajúca princíp väzby proteín - farbivo. Analytical Biochemistry, 72(1-2), 248-254.