Hej, nadšenci z bunkovej bunky! Ako dodávateľ buniek TET - 213 som mal svoj spravodlivý podiel skúseností zaoberajúcich sa týmito jedinečnými bunkami. V tomto blogu sa podelím o niekoľko tipov, ako si zachovať životaschopnosť buniek TET - 213.
Po prvé, pochopme, čo sú bunky TET - 213. Sú to typ bunkovej línie, ktorá preukázala veľký potenciál v rôznych výskumných oblastiach, ako sú neurovedy a štúdie rakoviny. Ale ich udržiavanie nažive a kopanie nie je vždy prechádzka v parku.
Bunková kultúra médium
Základom udržiavania akejkoľvek bunkovej línie je pravé kultivačné médium. Pre bunky TET - 213 je médium vysokej kvality nevyhnutnosťou. Zvyčajne odporúčam používať médium, ktoré je bohaté na základné živiny. Médium RPMI 1640, doplnené 10% fetálnym hovädzím sérom (FBS), penicilínom a streptomycínom, pre mňa pracovalo zázraky. FBS poskytuje rastové faktory a hormóny, ktoré tieto bunky musia prosperovať, zatiaľ čo antibiotiká pomáhajú predchádzať kontaminácii.
Nezabudnite správne uložiť médium. Udržujte ho pri 4 ° C a chráňte ho pred svetlom. Predtým, ako ho použijete, zohrejte ho až 37 ° C vo vodnom kúpeli. To napodobňuje telesnú teplotu a je pre bunky pohodlnejšia.
Inkubačné podmienky
Bunky TET - 213 sú o svojom prostredí dosť vyberavé. Radi sa inkubujú pri 37 ° C v zvlhčenom atmosfére s 5% CO₂. Toto prostredie veľmi podobá fyziologickým podmienkam v ľudskom tele.
Investujte do dobrého inkubátora. Mala by mať stabilnú teplotu a kontrolu CO₂. Pravidelne kontrolujte nastavenia a kalibráciu inkubátora, aby ste sa uistili, že všetko je v poriadku. Pravidelne vyčistite inkubátor, aby ste zabránili budovaniu kontaminantov.
Subkulturovanie
Subkulturovanie je dôležitým krokom pri udržiavaní životaschopnosti buniek. Keď TET - 213 buniek dosiahne asi 80 - 90% konfluencie, je čas ich rozdeliť. Najprv odstráňte staré médium a umyte bunky fosfátovým roztokom (PBS), aby ste sa zbavili akýchkoľvek zvyškov. Potom pridajte roztok trypsínu - EDTA na oddelenie buniek z kultivačnej banky. Inkubujte banku pri 37 ° C na niekoľko minút, kým bunky nezačnú zaokrúhliť nahor a oddeliť sa.
Akonáhle sú bunky oddelené, pridajte čerstvé médium na neutralizovanie trypsínu. Centrifúziu bunkovej suspenzie pri nízkej rýchlosti na peletu buniek. Resuspend peleta v čerstvom médiu a preneste bunky do bitiek novej kultúry pri vhodnej hustote očkovania. Hustota nasadenia okolo 5 x 10⁴ buniek/cm² zvyčajne funguje dobre pre bunky TET - 213.
Monitorovanie zdravia buniek
Pravidelné monitorovanie zdravia vašich buniek TET - 213 je rozhodujúce. Na kontrolu morfológie buniek použite fázový mikroskop. Zdravé bunky TET - 213 by mali mať rovnomerný tvar a mali by byť dobre - pripojené k banke. Ak si všimnete nejaké príznaky bunkovej smrti, ako sú plávajúce bunky alebo abnormálne tvary buniek, mohlo by to byť príznakom problému.
Môžete tiež vykonať test životaschopnosti, napríklad test vylúčenia trypanskej modrej. Zmiešajte malé množstvo svojej bunkovej suspenzie s trypanou modrou. Živé bunky vylučujú farbivo, zatiaľ čo mŕtve bunky ho vezmú a budú vyzerať modré. Počítajte počet živých a odumretých buniek pomocou hemocytometra na výpočet percentuálneho podielu životaschopnosti buniek.
Kvalita činidiel
Používanie vysoko kvalitných činidiel nie je obchodovateľné. Kvalita FBS, antibiotiká a ďalšie prísady môže mať významný vplyv na životaschopnosť buniek. Pri výbere FBS vyhľadajte dávku, ktorá bola testovaná na jej schopnosť podporovať rast buniek. Vyhnite sa používaniu platnosti reagencií alebo činidiel, ktoré boli nesprávne uložené.
Niektoré ďalšie faktory, ktoré je potrebné zvážiť, sú peptidy, ktoré sa môžu použiť v spojení s bunkami TET - 213. NapríkladMelanocytový proteín PMEL 17 (130 - 138) (ľud)preukázal potenciál v určitom výskume súvisiacich s bunkovou signalizáciou.Urechistachininin iaDynorfín A (1 - 17)sú tiež peptidy, ktoré sa dajú preskúmať v kontexte výskumu buniek TET - 213.
Riešenie problémov
Ak máte problémy s udržiavaním životaschopnosti vašich TET - 213 buniek, nepropadajte panike. Tu je niekoľko bežných problémov a riešení:
Kontaminácia: Ak vidíte príznaky bakteriálnej alebo hubovej kontaminácie, ako je napríklad oblačnosť v stredne alebo viditeľných kolóniách, okamžite zlikvidujte kontaminované kultúry. Dôkladne vyčistite inkubátor a všetko zariadenie. Pri manipulácii s bunkami nezabudnite postupovať podľa prísnych aseptických techník.
Zlý rast buniek: Ak bunky nerastú dobre, skontrolujte kultivačné médium. Je možné, že médium je staré alebo doplnky nefungujú správne. Uistite sa tiež, že inkubačné podmienky sú správne. Niekedy môže mierna zmena teploty alebo koncentrácie CO₂ ovplyvniť rast buniek.
Oddelenie buniek: Ak sa bunky príliš ľahko oddeľujú, mohlo by to byť spôsobené nadmernou trypsinizáciou. Nabudúce znížte čas inkubácie trypsínu. Uistite sa tiež, že riešenie trypsínu - EDTA je čerstvé.
Záverom možno povedať, že udržiavanie životaschopnosti buniek TET - 213 si vyžaduje pozornosť detailom a dobré pochopenie ich potrieb. Dodržiavaním týchto tipov môžete udržať svoje bunky TET - 213 zdravé a produktívne.
Ak ste na trhu s vysokými kvalitnými TET - 213, rád by som sa s vami porozprával. Či už ste výskumný pracovník pracujúci na malom projekte alebo veľkej miere biotechnologickej spoločnosti, môžem vám poskytnúť bunky, ktoré potrebujete. Oslovte, aby ste začali konverzáciu o vašich požiadavkách a o tom, ako môžeme spolupracovať.
Odkazy
- Freshney, RI (2016). Kultúra živočíšnych buniek: Príručka základnej techniky a špecializovaných aplikácií. Wiley.
- Doyle, A., & Griffiths, JB (2012). Kultúra buniek a tkanív: laboratórne postupy. Wiley - Blackwell.