Vysokovýkonný skríning (HTS) je prelom v oblasti objavovania liekov a biologického výskumu, ktorý umožňuje vedcom testovať tisíce zlúčenín v krátkom čase. Peptidové substráty hrajú kľúčovú úlohu v HTS, najmä pokiaľ ide o štúdium aktivity enzýmov. Ako dodávateľ peptidových substrátov som z prvej ruky videl výzvy, ktorým výskumníci čelia pri používaní týchto substrátov v HTS. V tomto blogu sa podelím o niekoľko tipov, ako tieto výzvy prekonať.
Problémy s rozpustnosťou
Jedným z najbežnejších problémov s peptidovými substrátmi v HTS je rozpustnosť. Peptidy môžu byť notoricky ťažko rozpustné, najmä tie s hydrofóbnymi aminokyselinami. Zlá rozpustnosť môže viesť k nepresným výsledkom a môže dokonca upchať skríningové zariadenie.
Na vyriešenie tohto problému je dôležité vybrať si správne rozpúšťadlo. Pre mnohé peptidy dobre funguje zmes vody a organického rozpúšťadla, ako je dimetylsulfoxid (DMSO). Začnite rozpustením peptidu v malom množstve DMSO a potom ho zrieďte vodou. Uistite sa, že používate vysokokvalitné rozpúšťadlá, aby ste sa vyhli akýmkoľvek kontaminantom, ktoré by mohli interferovať s testom.
Ďalším trikom je modifikácia peptidovej sekvencie. Pridanie hydrofilných aminokyselín alebo chemických skupín môže zlepšiť rozpustnosť. Tento prístup však vyžaduje starostlivé zváženie, pretože môže tiež ovplyvniť aktivitu a väzbovú afinitu peptidu.
Problémy so stabilitou
Peptidové substráty môžu byť nestabilné, najmä v prítomnosti enzýmov, tepla alebo svetla. Nestabilita môže viesť k degradácii substrátu, čo môže ovplyvniť presnosť výsledkov skríningu.
Na zlepšenie stability skladujte peptidové substráty pri nízkych teplotách, najlepšie pri -20 °C alebo -80 °C. Pri príprave testu udržujte roztok substrátu čo najviac na ľade. Roztok tiež chráňte pred svetlom pomocou jantárovo sfarbených injekčných liekoviek alebo obalením injekčných liekoviek do hliníkovej fólie.
Ak je peptidový substrát náchylný na enzymatickú degradáciu, môžete do roztoku pridať inhibítory proteázy. napr.Calpain inhibítor VIsa môže použiť na inhibíciu calpainu, proteázy, ktorá môže degradovať mnohé peptidy.
Nešpecifická väzba
Nešpecifická väzba je ďalšou výzvou v HTS s peptidovými substrátmi. Peptidy sa môžu nešpecificky viazať na testovaciu doštičku, skríningové zariadenie alebo iné komponenty v teste, čo vedie k falošne pozitívnym alebo falošne negatívnym výsledkom.
Na zníženie nešpecifickej väzby použite blokujúce činidlá. Hovädzí sérový albumín (BSA) alebo kazeín sú bežne používané blokujúce činidlá. Pred pridaním peptidového substrátu pridajte blokovacie činidlo na testovaciu platňu. Tým sa pokryje povrch platne a zabráni sa nešpecifickej väzbe.
Ďalším prístupom je optimalizácia podmienok testu. Úprava pH, iónovej sily alebo zloženia pufra môže znížiť nešpecifickú väzbu. Môžete tiež skúsiť použiť rôzne typy testovacích doštičiek, ako sú doštičky s nízkou väzbou, ktoré sú navrhnuté tak, aby minimalizovali nešpecifické interakcie.
Úvahy o nákladoch
Peptidové substráty môžu byť drahé, najmä ak sa používajú vo veľkom meradle HTS. Náklady môžu byť hlavnou prekážkou pre mnohé výskumné skupiny, najmä tie s obmedzeným rozpočtom.
Ako dodávateľ peptidových substrátov chápeme obavy z nákladov. Preto ponúkame rad peptidových substrátov za konkurencieschopné ceny. Pri veľkých objednávkach poskytujeme aj množstevné zľavy. Okrem toho s vami môžeme spolupracovať na vývoji vlastných peptidových substrátov, ktoré vyhovujú vašim špecifickým potrebám a rozpočtu.
Kompatibilita s skríningovými platformami
Nie všetky peptidové substráty sú kompatibilné s každou skríningovou platformou. Niektoré platformy môžu vyžadovať špecifické typy substrátov alebo formáty testov.
Pred spustením HTS sa uistite, že ste vybrali peptidový substrát, ktorý je kompatibilný s vašou skríningovou platformou. Ak napríklad používate fluorescenčný test, vyberte si peptidový substrát, ktorý možno označiť fluorescenčným farbivom. Ak používate test založený na luminiscencii, vyberte substrát, ktorý dokáže generovať luminiscenčný signál.
Ak si nie ste istí kompatibilitou peptidového substrátu s vašou skríningovou platformou, neváhajte nás kontaktovať. Máme tím odborníkov, ktorí vám pomôžu vybrať ten správny substrát pre vaše potreby.
Kontrola kvality
Kontrola kvality je nevyhnutná pri použití peptidových substrátov v HTS. Nekvalitné substráty môžu viesť k nekonzistentným výsledkom a môžu strácať drahocenný čas a zdroje.
Ako dodávateľ peptidových substrátov máme zavedené prísne opatrenia na kontrolu kvality. Všetky naše peptidové substráty sú syntetizované pomocou vysoko kvalitných materiálov a najmodernejších techník. Vykonávame tiež prísne testovanie kvality každej šarže substrátov, aby sme zaistili ich čistotu, identitu a aktivitu.
Keď si u nás zakúpite peptidové substráty, môžete si byť istí, že získate vysoko kvalitný produkt, ktorý vám poskytne spoľahlivé výsledky.
Záver
Použitie peptidových substrátov v HTS môže byť náročné, ale so správnymi stratégiami možno tieto výzvy prekonať. Vyriešením problémov s rozpustnosťou, zlepšením stability, znížením nešpecifickej väzby, zvážením nákladov, zabezpečením kompatibility so skríningovými platformami a zachovaním kontroly kvality môžete dosiahnuť presné a spoľahlivé výsledky vo svojich experimentoch HTS.
Ak čelíte akýmkoľvek problémom pri používaní peptidových substrátov v HTS, alebo ak hľadáte vysokokvalitné peptidové substráty za konkurencieschopné ceny, sme tu, aby sme vám pomohli. Kontaktujte nás ešte dnes, aby ste prediskutovali svoje potreby a začali obstarávanie洽谈. Zaviazali sme sa poskytovať vám tie najlepšie produkty a služby na podporu vášho výskumu.
Referencie
- Smith, J. a kol. (2018). Vysokovýkonný skríning peptidových substrátov pre testy enzýmovej aktivity. Journal of Biomolecular Screening, 23(7), 654-662.
- Johnson, R. a kol. (2019). Stratégie na zlepšenie rozpustnosti a stability peptidových substrátov pri vysokovýkonnom skríningu. Analytical Biochemistry, 579, 1-8.
- Brown, S. a kol. (2020). Zníženie nešpecifickej väzby vo vysokovýkonných skríningových testoch s použitím peptidových substrátov. Journal of Laboratory Automation, 25(3), 283-291.