Ahoj! Ako dodávateľ buniek Tet - 213 som veľmi nadšený, že sa s vami môžem podeliť o to, ako vykonávať skríning aptamérov na bunkách Tet - 213. Skríning aptamérov je skvelý proces, ktorý nám môže pomôcť nájsť tieto špeciálne krátke sekvencie nukleových kyselín, aptaméry, ktoré sa môžu viazať na špecifické ciele s vysokou afinitou a špecifickosťou. A pokiaľ ide o Tet - 213 článkov, je to úplne nový svet možností!
Najprv si povedzme niečo o Tet - 213 bunkách. Tieto bunky sú celkom jedinečné a majú rôzne aplikácie v biologickom výskume. Viac podrobností o nich nájdete na našej webovej stránkeTet - 213.
Príprava na skríning aptaméru
Než sa pustíme do samotného procesu skríningu, musíme si veci pripraviť. Prvým krokom je správna kultivácia buniek Tet - 213. Chcete sa uistiť, že sú v zdravom stave a dobre rastú v správnom kultivačnom médiu. Zvyčajne používame špecifické médium, ktoré poskytuje všetky živiny, ktoré tieto bunky potrebujú, aby prosperovali.
Ďalej musíme pripraviť počiatočnú knižnicu aptamérov. Táto knižnica je ako veľký súbor rôznych sekvencií nukleových kyselín. Obsahuje milióny alebo dokonca miliardy rôznych aptamérov, z ktorých každý má jedinečnú sekvenciu. Túto knižnicu použijeme na spustenie procesu skríningu.
Proces skríningu
Teraz poďme do hrubej časti skríningu aptaméru na bunkách Tet - 213. Najbežnejšia metóda sa nazýva Systematic Evolution of Ligands by Exponencial Enrichment (SELEX). Krok za krokom to funguje takto:
Krok 1: Inkubácia
Vezmeme knižnicu aptamérov a zmiešame ju s bunkami Tet - 213. Necháme ich inkubovať určitú dobu, zvyčajne niekoľko hodín. Počas tejto doby budú mať aptaméry v knižnici možnosť viazať sa na povrch buniek Tet-213. Niektoré aptaméry sa budú viazať silne, zatiaľ čo iné sa nebudú viazať vôbec.
Krok 2: Oddelenie
Po inkubácii musíme oddeliť aptaméry, ktoré sú naviazané na bunky, od tých, ktoré nie sú. Existuje niekoľko spôsobov, ako to urobiť. Jednou z bežných metód je použitie odstreďovania. Zmes otáčame vysokou rýchlosťou a bunky s naviazanými aptamérmi vytvoria na dne skúmavky peletu, zatiaľ čo nenaviazané aptaméry zostanú v supernatante.
Krok 3: Elúcia
Keď sme oddelili naviazané aptaméry, musíme ich dostať z buniek. Toto sa nazýva elúcia. Na prerušenie väzieb medzi aptamérmi a bunkami používame špeciálny pufer. Po elúcii máme kolekciu aptamérov, ktoré majú vyššiu afinitu k Tet-213 bunkám v porovnaní s pôvodnou knižnicou.
Krok 4: Amplifikácia
Počet aptamérov, ktoré získame po elúcii, je zvyčajne dosť malý. Musíme ich teda zosilniť. Používame techniku nazývanú polymerázová reťazová reakcia (PCR). PCR je ako kopírovací stroj na DNA alebo RNA. Dokáže vytvoriť milióny kópií aptamérov v krátkom čase.
Krok 5: Iterácia
Proces skríningu nekončí po jednom kole. Kroky inkubácie, separácie, elúcie a amplifikácie zvyčajne opakujeme niekoľkokrát. Každé kolo sa nazýva výberový cyklus. S každým cyklom sme čoraz bližšie k nájdeniu aptamérov s najvyššou afinitou a špecifickosťou pre bunky Tet - 213.
Vyhodnotenie vybraných aptamérov
Po niekoľkých výberových cykloch máme skupinu aptamérov, o ktorých si myslíme, že sú dobrými kandidátmi. Ale nemôžeme len predpokladať, že sú dokonalé. Musíme ich vyhodnotiť.
Jedným zo spôsobov hodnotenia aptamérov je meranie ich väzbovej afinity. Môžeme použiť techniky ako povrchová plazmónová rezonancia (SPR) alebo izotermická titračná kalorimetria (ITC). Tieto metódy nám môžu povedať, ako silne sa aptaméry viažu na bunky Tet-213.
Musíme tiež skontrolovať špecifickosť aptamérov. Chceme sa uistiť, že sa viažu iba na bunky Tet - 213 a nie na iné typy buniek. Môžeme to urobiť testovaním aptamérov proti rôznym bunkovým líniám.
Aplikácie aptamérov vybraných z buniek Tet-213
Aptaméry, ktoré vyberáme z buniek Tet - 213, môžu mať širokú škálu aplikácií. Napríklad môžu byť použité v diagnostických testoch. Tieto aptaméry môžeme pripojiť k senzorom alebo iným detekčným zariadeniam. Keď sú prítomné bunky Tet - 213, aptaméry sa na ne naviažu a senzor dokáže väzbu detekovať, čo nám dá signál.
Môžu byť tiež použité pri cielenom podávaní liekov. K aptamérom môžeme pripojiť lieky. Pretože aptaméry majú vysokú afinitu k bunkám Tet-213, môžu prenášať liečivá priamo do týchto buniek, čím sa zvyšuje účinnosť liečby a znižujú sa vedľajšie účinky.
Ďalšie úvahy
Počas procesu skríningu aptaméru existuje niekoľko ďalších vecí, ktoré musíme mať na pamäti. Rozhodujúca je napríklad kvalita článkov Tet - 213. Ak bunky nie sú zdravé alebo sú kontaminované, môže to ovplyvniť výsledky skríningu.
Tiež podmienky skríningu, ako je teplota, pH a zloženie pufra, môžu mať vplyv na väzbu aptamérov na bunky. Aby sme dosiahli čo najlepšie výsledky, musíme tieto podmienky optimalizovať.
Súvisiace peptidy
Ak máte záujem o ďalšie súvisiace peptidy, ponúkame tiežDynorphin A (1 - 13), amid, prasaaSpojovací segment fibronektínu typu III (1 – 25). Tieto peptidy majú svoje vlastné jedinečné vlastnosti a aplikácie v biologickom výskume.
Záver
Uskutočňovanie skríningu aptaméru na bunkách Tet - 213 je vzrušujúci a obohacujúci proces. Môže to viesť k objavu aptamérov s vysokou afinitou a špecifickosťou pre tieto bunky, ktoré je možné použiť v rôznych aplikáciách. Ako dodávateľ článkov Tet - 213 sme tu, aby sme vás podporili vo vašom výskume. Ak máte záujem o kúpu buniek Tet - 213 alebo máte akékoľvek otázky týkajúce sa skríningu aptamérov, neváhajte nás kontaktovať a začať diskusiu o obstarávaní. Tešíme sa na spoluprácu!
Referencie
- Ellington, AD a Szostak, JW (1990). In vitro selekcia molekúl RNA, ktoré viažu špecifické ligandy. Nature, 346 (6287), 818 - 822.
- Tuerk, C. a Gold, L. (1990). Systematický vývoj ligandov exponenciálnym obohatením: RNA ligandy na bakteriofágovú T4 DNA polymerázu. Science, 249 (4968), 505 - 510.
- Jayasena, SD (1999). Aptaméry: vznikajúca trieda molekúl, ktoré súperia s protilátkami v diagnostike. Klinická chémia, 45(9), 1628 - 1650.