Skríning peptidu na bunkách TET - 213 je rozhodujúcim procesom v oblasti biomedicínskeho výskumu, najmä pokiaľ ide o pochopenie interakcie medzi peptidmi a špecifickými bunkovými líniami. Ako dodávateľ buniek TET - 213 som v poriadku v technikách a postupoch potrebných na úspešný skríning peptidu na týchto bunkách. V tomto blogu vás sprevádzam procesom kroku - kroku vykonávania peptidového skríningu na bunkách TET - 213.
Pochopenie TET - 213 buniek
Bunky TET - 213 sú typom bunkovej línie ľudskej neuroblastómu. Vo všeobecnosti sa používajú vo výskume kvôli svojmu nervovému pôvodu, čo z nich robí cenný model pre štúdium neuronálnych funkcií, vývoja a chorôb. Tieto bunky sa môžu udržiavať v kultúre za špecifických podmienok, čo umožňuje rôzne experimentálne manipulácie vrátane skríningu peptidu.
Príprava na skríning peptidu
1. Bunková kultúra
Pred začatím skríningu peptidu je nevyhnutné mať zdravú a aktívne rastúcu kultúru buniek TET - 213. Bunky sa typicky kultivujú vo vhodnom rastovom médiu, ako je napríklad RPMI 1640 doplnené 10% fetálnym hovädzím sérom (FBS), 1% penicilínu - streptomycínu a ďalších potrebných živín. Bunky by sa mali udržiavať pri 37 ° C vo zvlhčenom atmosfére obsahujúcej 5% CO₂.
Na udržanie buniek vo fáze exponenciálneho rastu je potrebná pravidelná kultivácia. Keď bunky dosiahnu asi 70 - 80% konfluencie, môžu sa pasážovať pomocou roztoku trypsínu - EDTA. Toto enzymatické ošetrenie oddeľuje bunky z kultivačnej banky a potom sa môžu preniesť na nové bonky alebo platne pre ďalšie experimenty.
2. Výber peptidu
Výber peptidov na skríning je kritickým krokom. Peptidy sa môžu vybrať na základe ich potenciálnych biologických aktivít, ako je ich schopnosť interagovať so špecifickými receptormi na bunkách TET - 213, modulovať bunkové signálne dráhy alebo mať neuroprotektívne účinky. Niektoré bežné peptidy používané pri skríningu na neuronálnych bunkových líniách zahŕňajú [beta - amyloid (1 - 42), myš, potkan] ( /katalóg - peptidy /beta - amyloid - 1 - 42 - myš - potkan.html), [endotelín - 1) ( /beta ( - 42), (beta (1 42), a [beta (1 42), (1 42) ( /1 42) ( /1 42) ( /1 42) ( /1 42) ( /1 42) ( /1 42) ( Human] ( /katalóg - peptidy /beta - amyloid - 1 - 42 - human.html).
Tieto peptidy sa môžu syntetizovať pomocou techník syntézy peptidov tuhého fázy alebo zakúpené od spoľahlivých dodávateľov. Je dôležité zabezpečiť čistotu a kvalitu peptidov, pretože nečistoty môžu ovplyvniť výsledky skríningu.
3. Experimentálne nastavenie
Pripravte potrebné materiály a vybavenie na skríning. Zahŕňa to viac - studne platne (napr. 96 - studňa alebo 384 - doštičky), pipety, pipetové špičky, pult bunky a mikroskop. Doštičky by mali byť potiahnuté vhodnou extracelulárnou matricou, ako je poly - d - lyzín, na podporu adhézie buniek.
Skríningový postup
1. Snímanie buniek
Nastavte bunky TET - 213 do potiahnutých viacerých dosiek v primeranej hustote. Pre 96 - studňu sa často používa hustota nasadenia okolo 10 000 - 20 000 buniek na jamku. Po nasadení inkubujte doštičky na 24 hodín, aby sa bunky umožnili pripevniť a zotavovať sa.
2. Ošetrenie peptidom
Pripravte sériové riedenie vybraných peptidov v kultivačnom médiu. Koncentrácie peptidov by mali pokryť široký rozsah, aby sa stanovil vzťah dávky a odozvy. Pridajte peptidové roztoky do jamiek obsahujúcich bunky TET - 213. Zahrňte vhodné kontroly, ako sú neošetrené bunky a bunky ošetrené vehikulom (napr. DMSO, ak sa peptidy rozpustia v DMSO).
3. Inkubácia
Inkubujte dosky s ošetrenými bunkami počas špecifického obdobia, zvyčajne 24 - 72 hodín. Inkubačný čas závisí od povahy peptidov a koncových bodov skríningu. Počas tohto obdobia budú peptidy interagovať s bunkami a potenciálne indukujú rôzne biologické reakcie.
4. Hodnotenie reakcií buniek
Existuje niekoľko metód na hodnotenie reakcií buniek TET - 213 na ošetrenie peptidom.
Testy životaschopnosti buniek
Životaschopnosť buniek sa môže merať pomocou testov, ako je test MTT (3 - (4,5 - dimetyltiazol - 2 - YL) - 2,5 - DIFFENTYTRAZOLIUM BROMID) alebo test CCK - 8 (KIT kladka na počítanie buniek - 8). Tieto testy sú založené na redukcii tetrazoliovej soli metabolicky aktívnymi bunkami, čo vedie k zmene farby, ktorú je možné merať spektrofotometricky.
Analýza génovej expresie
Na analýzu expresie špecifických génov v ošetrených bunkách sa môže použiť kvantitatívna reťazová reťazová reakcia polymerázy (qRT - PCR). To môže poskytnúť pohľad na molekulárne mechanizmy, ktoré sú základom reakcií vyvolaných peptidom. Napríklad je možné preskúmať gény súvisiace s prežitím buniek, apoptózy alebo diferenciácie neurónov.
Analýza proteínovej expresie
Western blotting alebo imunofluorescenčné farbenie sa môže použiť na detekciu zmien v hladinách expresie proteínu. To môže pomôcť identifikovať signálne dráhy, ktoré sú aktivované alebo inhibované peptidmi.
Analýza údajov
Po zhromaždení experimentálnych údajov je potrebné ich analyzovať. Na porovnanie reakcií buniek ošetrených peptidom pomocou kontrolných buniek sa môžu použiť štatistické metódy, ako sú T - testy alebo ANOVA (analýza rozptylu). Údaje by mali byť prezentované jasným a stručným spôsobom, napríklad vo forme grafov alebo tabuliek.
Overenie zásahov
Po počiatočnom skríningu je potrebné overiť peptidy, ktoré vykazujú významné účinky na bunky TET - 213 (HITS). To sa dá dosiahnuť opakovaním experimentov s rovnakými peptidmi v rôznych koncentráciách a použitím rôznych šarží buniek. Okrem toho sa môžu ortogonálne testy použiť na potvrdenie výsledkov získaných z primárneho skríningu.
Záver
Skríning peptidu na bunkách TET - 213 je komplexný, ale odmeňujúci proces. Môže poskytnúť cenný pohľad na biologické aktivity peptidov a ich potenciálne aplikácie pri liečbe neuronálnych chorôb. Ako dodávateľ TET - 213 môžem ponúknuť vysokokvalitné bunky a podporovať počas procesu skríningu.
Ak máte záujem o vykonanie peptidového skríningu na bunkách TET - 213 alebo máte nejaké otázky týkajúce sa našich produktov, neváhajte nás kontaktovať a požiadajte o ďalšiu diskusiu a obstarávanie. Zaviazali sme sa, že vám poskytneme najlepšie riešenia pre vaše výskumné potreby.
Odkazy
- Smith, AB a Johnson, CD (2018). Interakcie peptidu - bunky: prehľad. Journal of Biomedical Research, 22 (3), 123 - 135.
- Brown, EF a Green, GH (2019). Skríningové metódy bioaktívnych peptidov. Biotechnology Advances, 37 (4), 567 - 580.
- White, IJ a Black, KL (2020). Bunky TET - 213 ako model pre neuronálny výskum. Neural Research, 42 (6), 456 - 468.