V oblasti biologického výskumu sa bunková línia TET - 213 objavila ako významný model pre rôzne experimentálne výskumy, najmä v štúdiách týkajúcich sa neurovedy a onkológie. Ako popredný dodávateľ buniek TET - 213 chápeme dôležitosť výberu vhodných transfekčných činidiel na účinné dodávanie génov do týchto buniek. Cieľom tohto blogového príspevku je preskúmať transfekčné činidlá, ktoré sú vhodné pre TET - 213, a poskytnúť informácie o ich výhodách a obmedzeniach.
Pochopenie TET - 213 buniek
TET - 213 je ľudská neuronálna bunková línia, ktorá sa bežne používa vo výskume vďaka svojej schopnosti diferencovať sa na bunky podobné neurónu. Tieto bunky sú odvodené od nádoru neuroblastómu a zachovávajú si mnoho charakteristík neuronálnych progenitorových buniek. Ich jedinečné vlastnosti ich robia cennými pri štúdiu vývoja neurónov, funkcie a patogenézy neurologických chorôb. Transfekcia exogénnych génov do buniek TET - 213 môže pomôcť výskumníkom porozumieť génovej funkcii, regulačným mechanizmom a účinkom špecifických proteínov na bunkové procesy.
Kľúčové úvahy o transfekcii v bunkách TET - 213
Pred výberom transfekčného činidla je potrebné zvážiť niekoľko faktorov. Po prvé, účinnosť transfekcie je rozhodujúca. Vysoko účinná transfekcia zaisťuje, že veľká časť buniek zaberá exogénnu DNA alebo RNA, čo umožňuje robustnú expresiu cieľového génu. Po druhé, životaschopnosť buniek sa musí udržiavať po transfekcii. Niektoré transfekčné činidlá môžu byť pre bunky toxické, čo vedie k bunkovej smrti alebo abnormálnemu bunkovému správaniu. Po tretie, typ transfekovaného nukleovej kyseliny (DNA, RNA alebo oligonukleotidy) a jej veľkosť môže tiež ovplyvniť výber transfekčného činidla.
Transfekčné činidlá vhodné pre bunky TET - 213
Transfekčné činidlá na báze lipidov
Transfekčné činidlá na báze lipidov sú jedným z najbežnejšie používaných typov transfekčných činidiel. Pracujú tak, že tvoria lipozómy, ktoré enkapsulujú nukleovú kyselinu a spájajú bunkovú membránu, čo umožňuje nukleovú kyselinu vstúpiť do bunky. Lipofectamín 2000 je dobre známe transfekčné činidlo na báze lipidov, ktoré sa široko používa na transfekciu buniek TET - 213. Ponúka vysokú účinnosť transfekcie, relatívne nízku toxicitu a je vhodný na transfekciu DNA aj RNA.
Mechanizmus lipofefektamínu 2000 zahŕňa tvorbu pozitívne nabitých lipozómov, ktoré interagujú s negatívne nabitými nukleovou kyselinou za vzniku lipoplexov. Tieto lipoplexy sú potom internalizované bunkami prostredníctvom endocytózy. Akonáhle je vo vnútri bunky, nukleová kyselina sa uvoľňuje a môže sa prepravovať do jadra na génovú expresiu.
Ďalšie činidlo na báze lipidov, Lipofectamín 3000, tiež preukázal dobrý výkon pri transfekcii buniek TET - 213. Je to vylepšená verzia Lipofectamín 2000 so zvýšenou účinnosťou transfekcie a zníženou toxicitou. Lipofectamín 3000 používa novú formuláciu, ktorá umožňuje lepšiu interakciu s bunkovou membránou a účinnejšie dodávanie nukleových kyselín.
Polymérne transfekčné činidlá
Transfekčné činidlá založené na polyméri sú ďalšou možnosťou pre transfekciu buniek TET - 213. Polyetylenimín (PEI) je bežne používané činidlo na báze polyméru. PEI je katiónový polymér, ktorý môže kondenzovať nukleové kyseliny do malých častíc a podporovať ich absorpciu bunkami. Uvádza sa, že v bunkách TET - 213 dosahuje vysokú účinnosť transfekcie, najmä na transfekciu DNA. Výhodou PEI je nízka cena a ľahké použitie. Môže však byť toxický pre bunky pri vysokých koncentráciách, takže je potrebná starostlivá optimalizácia podmienok transfekcie.
Jetpei je komerčné transfekčné činidlo na báze polyméru, ktoré bolo navrhnuté tak, aby minimalizovali toxicitu pri zachovaní vysokej účinnosti transfekcie. Úspešne sa používa pri transfekcii buniek TET - 213, čo poskytuje dobrú rovnováhu medzi účinnosťou transfekcie a životaschopnosťou buniek.
Transfekčné vektory na báze vírusu
Vektory na báze vírusu sa tiež široko používajú na dodávanie génov do buniek TET - 213. Adenovírusové vektory sú známe svojou vysokou účinnosťou transfekcie a schopnosťou infikovať deliace aj ne -deliace bunky. Môžu prepravovať relatívne veľké množstvo exogénnej DNA a poskytovať silnú a trvalú expresiu génov. Produkcia vektorov adenovírusových vektorov je však zložitejšia a časovo náročnejšia v porovnaní s vírusovými transfekčnými činidlami.
Vektory Lentivírusu sú ďalšou možnosťou. Môžu integrovať exogénnu DNA do genómu hostiteľských buniek, čo vedie k stabilnej génovej expresii. Vektory lentivírusu sú vhodné pre dlhodobé štúdie v bunkách TET - 213, napríklad generovanie stabilných bunkových línií. Vyžadujú však aj osobitné zaobchádzanie v dôsledku ich potenciálnych rizikových rizík Biohazardu.
Porovnanie transfekčných činidiel pre bunky TET - 213
Pri porovnávaní rôznych transfekčných činidiel je dôležité zvážiť ich výkonnosť z hľadiska účinnosti transfekcie, životaschopnosti buniek, ľahkého používania a nákladov. Reagenty založené na lipidoch, ako je lipofefectamín 2000 a 3000, sa používajú relatívne ľahko a majú vysokú účinnosť transfekcie s prijateľnou životaschopnosťou buniek. Sú vhodné pre krátkodobé aj dlhodobé experimenty. Činidlá založené na polyméri ako PEI a JetPEI sú náklady - efektívne a môžu dosiahnuť dobrú účinnosť transfekcie, ale je potrebná optimalizácia toxicity. Vírusové vektory ponúkajú vysoké dodávanie génov s vysokou účinnosťou a stabilnú expresiu, ale vyžadujú špecializovanejšie zariadenia a bezpečnostné opatrenia.
Aplikácie transfekovaných buniek TET - 213
Po úspešnom transfekcii sa môžu bunky TET - 213 použiť v rôznych aplikáciách. Napríklad v štúdiách génovej funkcie sa transfekované bunky môžu použiť na skúmanie úlohy špecifických génov pri vývoji a funkcii neurónov. Nadmerným exprimovaním alebo zrazením konkrétneho génu môžu vedci pozorovať zmeny v bunkovej morfológii, uvoľňovaní neurotransmiterov a dráhy prenosu signálu.
Pri objavovaní liečiva sa transfekované bunky TET - 213 môžu použiť ako skríningový model na identifikáciu potenciálnych terapeutických látok. Napríklad gény spojené s neurologickými chorobami sa môžu transfekovať do buniek a potom sa bunky môžu liečiť rôznymi zlúčeninami na vyhodnotenie ich účinkov na fenotypy súvisiace s ochorením.
Navyše, bunky TET - 213 transfekované génmi kódujúcimi fluorescenčné proteíny sa môžu použiť na živé štúdie zobrazovania buniek. To umožňuje vedcom pozorovať dynamické bunkové procesy v reálnom čase.
Súvisiace peptidy pre pridružené experimenty
V niektorých experimentoch zahŕňajúcich transfekované bunky TET - 213 sa môžu použiť ďalšie peptidy. NapríkladCyklo (RADFK),Látka P (9 - 11)aBeta - amyloid (1 - 40), človekMôže sa použiť v štúdiách súvisiacich s neuronálnou signalizáciou, interakciami peptid -receptorov a neurodegeneratívnych chorôb. Tieto peptidy môžu pomôcť pri ďalšom objasnení mechanizmov, ktoré sú základom neuronálnej funkcie a vývoja chorôb.
Záver
Výber vhodného transfekčného činidla pre bunky TET - 213 je rozhodujúci pre úspešné dodávanie génov a následné experimentálne štúdie. Lipidové, polymérne a vírusové transfekčné činidlá majú svoje vlastné výhody a obmedzenia. Vedci by mali starostlivo zvážiť špecifické požiadavky svojich experimentov, ako je účinnosť transfekcie, životaschopnosť buniek a typ transfekovanej nukleovej kyseliny, pri výbere transfekčného činidla.
Ako dodávateľ buniek TET - 213 sme sa zaviazali poskytovať vysokokvalitné bunky a ponúkať vedenie najlepších postupov pre bunkovú kultúru a transfekciu. Ak máte záujem o nákup TET - 213 buniek pre váš výskum alebo máte otázky týkajúce sa transfekčných činidiel a súvisiacich experimentov, neváhajte nás kontaktovať a požiadajte o ďalšie informácie a prediskutujte potenciálne príležitosti na spoluprácu.
Odkazy
- Sambrook, J. a Russell, DW (2001). Molekulárne klonovanie: laboratórna príručka. Cold Spring Harbour Laboratory Press.
- Chen, C., & Okayama, H. (1987). Vysoká účinnosť transformácie cicavčích buniek plazmidovou DNA. Molekulárna a bunková biológia, 7 (8), 2745 - 2752.
- Amara, F., Rehem, A., & Galy, A. (2016). Preskúmanie súčasných metód transfekcie a systémy doručovania. Journal of Pharmacy & BioAllied Sciences, 8 (3), 181 - 187.