Bežné problémy a riešenia v procese syntézy peptidov zahŕňajú nasledujúce aspekty:
Obsah peptidov: Obsah peptidov sa týka percenta peptidových látok vo vzorke v porovnaní s nepeptidovými látkami. V peptidových produktoch sú okrem samotného peptidu zahrnuté aj nesolné zložky zavedené počas výrobného procesu, ako je voda, absorbované rozpúšťadlá, koordinačné ióny a soli.
Chemická stabilita:
Deamidačná reakcia: Asn/Gln zvyšky sa ľahko hydrolyzujú za vzniku Asp/Glu.
Hydrolýza: Peptidové väzby v peptidoch sa ľahko rozbijú hydrolýzou, najmä tie, ktoré sa tvoria účasťou Asp, najmä peptidové väzby Asp Pro a Asp Gly.
Racemizačná reakcia: Všetky aminokyselinové zvyšky okrem Gly majú chirálne alfa atómy uhlíka a sú náchylné na racemizačnú reakciu pri alkalickej katalýze. Asp zvyšky sú najviac náchylné na racemizačné reakcie.
- eliminačná degradácia: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr a ďalšie zvyšky môžu byť všetky degradované prostredníctvom - eliminácie, ktorá sa pravdepodobnejšie vyskytuje pri alkalickom pH a je ovplyvnená teplotou a kovovými iónmi
Fyzická stabilita:
Denaturácia, adsorpcia, agregácia alebo precipitácia: Denaturácia peptidov zvyčajne súvisí s deštrukciou terciárnych a sekundárnych štruktúr. V denaturovanom stave sú peptidy náchylnejšie na chemické reakcie a ich aktivita sa ťažko obnovuje. Medziprodukt vytvorený počas procesu denaturácie má nízku rozpustnosť a je náchylný na agregáciu a precipitáciu
konzervácia:
Najlepšie podmienky skladovania: Peptidy sa vo všeobecnosti skladujú vo forme lyofilizovaného prášku, ktorý je veľmi stabilný pri -20 stupňoch, najmä po lyofilizácii a skladovaní v -20 stupňoch sušenia. Väčšina peptidov môže byť pri tejto teplote skladovaná niekoľko rokov bez zmeny. Aby sa znížil vplyv vlhkosti, lyofilizované peptidy by sa mali pred vystavením vzduchu obnoviť na izbovú teplotu v suchých podmienkach.
Balenie: Spoločnosť Hesheng Biotechnology odporúča malé balenie, aby sa predišlo opakovaným cyklom zmrazovania a rozmrazovania, znížil sa počet otvorov a uzáverov nádob, čím sa znížila pravdepodobnosť nesprávnej manipulácie alebo bakteriálnej kontaminácie a zabezpečila sa stabilita peptidov.
Testovanie čistoty:
Záruka čistoty: Všetky dodané peptidy dosiahli požadovanú čistotu a peptidy, ktoré nespĺňajú štandard, budú vyradené. Výsledky detekcie HPLC a MS môžu overiť čistotu a molekulovú hmotnosť peptidu a zároveň zobraziť hlavné nečistoty.
Iné detekčné metódy, ako je analýza aminokyselín alebo elementárna analýza, môžu potvrdiť zloženie aminokyselín peptidov ako doplnkový prostriedok na potvrdenie peptidov
Technológia syntézy:
Syntéza peptidov na pevnej fáze: Syntéza peptidov na pevnej fáze nevyžaduje čistenie medziproduktov, čo umožňuje kontinuálne procesy syntézy a kladie základy pre automatizáciu syntézy peptidov. Na základe chemickej syntézy Fmoc bol cieľový peptid syntetizovaný kovalentným spojením karboxylovej skupiny C-koncovej aminokyseliny s nerozpustnou polymérnou živicou a potom vychádzajúc z aminoskupiny aminokyseliny.
Vyššie uvedený obsah sumarizuje bežné problémy a protiopatrenia pri syntéze peptidov, ktoré zahŕňajú viaceré aspekty, ako je chemická stabilita, fyzikálna stabilita, podmienky skladovania, testovanie čistoty atď.