Ako sa kvantifikujú katalógové peptidy?
Ahoj! Som dodávateľ katalógových peptidov a dnes sa chcem porozprávať o tom, ako postupujeme pri kvantifikácii týchto malých chlapcov. Peptidy sú mimoriadne dôležité v mnohých oblastiach, od výskumu po medicínu, a získanie presnej kvantifikácie je kľúčové.
Najprv si povedzme, prečo vôbec potrebujeme kvantifikovať katalógové peptidy. Keď výskumníci alebo ľudia v lekárskej oblasti používajú peptidy, musia presne vedieť, s akým množstvom pracujú. Či už ide o laboratórny experiment, klinickú skúšku alebo vývoj nového lieku, na presných množstvách záleží. Ak použijete príliš málo, vaše výsledky nemusia byť presné a ak použijete príliš veľa, môžete celú vec pokaziť.
Takže, ako to urobíme? Existuje niekoľko rôznych metód a ja ich pre vás rozoberiem.
Jedným z najbežnejších spôsobov je UV - Vis spektroskopia. Táto metóda využíva skutočnosť, že peptidy absorbujú ultrafialové a viditeľné svetlo pri špecifických vlnových dĺžkach. Aminokyseliny ako tryptofán, tyrozín a fenylalanín majú určité absorpčné vlastnosti. Keď vyžarujeme svetlo pri určitej vlnovej dĺžke cez roztok nášho peptidu, môžeme zmerať, koľko tohto svetla sa absorbuje. Na základe absorpčnej hodnoty a známeho extinkčného koeficientu peptidu (ktorý súvisí s jeho aminokyselinovým zložením) môžeme vypočítať koncentráciu peptidu v roztoku. Napríklad, ak máme peptid s vysokým obsahom tryptofánu, absorbuje viac svetla pri približne 280 nm. Na zistenie koncentrácie používame jednoduchý vzorec založený na Beer - Lambertovom zákone. Je to pomerne rýchla a jednoduchá metóda, ale má určité obmedzenia. Kontaminanty v peptidovom roztoku môžu tiež absorbovať svetlo pri rovnakých vlnových dĺžkach, čo môže vyvrátiť naše merania.
Ďalšou populárnou metódou je Bradfordov test. Toto je kolorimetrický test, ktorý sa opiera o farbivo s názvom Coomassie Brilliant Blue G - 250. Keď sa toto farbivo naviaže na peptid, zmení farbu. Potom môžeme merať absorbanciu farebného roztoku pri konkrétnej vlnovej dĺžke (zvyčajne okolo 595 nm). Množstvo zmeny farby je úmerné množstvu peptidu v roztoku. Vytvoríme štandardnú krivku pomocou známych koncentrácií referenčného peptidu a potom porovnáme absorbanciu našej neznámej vzorky peptidu s touto krivkou, aby sme určili jej koncentráciu. Bradfordov test je dosť citlivý, ale môže byť ovplyvnený určitými látkami vo vzorke, ako sú detergenty alebo soli.
Na kvantifikáciu peptidov sa široko používa aj HPLC alebo vysokoúčinná kvapalinová chromatografia. Pri HPLC oddeľujeme peptid od ostatných zložiek vo vzorke na základe jeho chemických vlastností, ako je jeho hydrofóbnosť. Roztok peptidu vstrekneme do kolóny naplnenej stacionárnou fázou a potom použijeme mobilnú fázu (kvapalné rozpúšťadlo) na pretlačenie peptidu cez kolónu. Rôzne peptidy sa budú pohybovať cez kolónu rôznymi rýchlosťami a môžeme ich detekovať, keď vychádzajú z kolóny pomocou detektora, zvyčajne UV detektora. Porovnaním plochy píku nášho záujmového peptidu s plochami píkov známych štandardov môžeme vypočítať jeho koncentráciu. HPLC je skvelá, pretože dokáže separovať a kvantifikovať peptidy aj v zložitých zmesiach, ale je to trochu časovo náročnejšie a vyžaduje si to špecializované vybavenie.
Teraz si povedzme niečo o niektorých katalógových peptidoch, ktoré ponúkame. VezmiteEntero-Hylambatinnapríklad. Keď kvantifikujeme tento peptid, používame kombináciu týchto metód, aby sme dosiahli čo najpresnejší výsledok. Najprv použijeme UV - Vis spektroskopiu, aby sme získali hrubý odhad koncentrácie, a potom ju dvakrát skontrolujeme pomocou HPLC. Týmto spôsobom môžeme zohľadniť akékoľvek potenciálne kontaminanty alebo interferencie vo vzorke.
Ďalší jeE[c(RGDyK)]2. Tento peptid má niektoré jedinečné vlastnosti a pri jeho kvantifikácii musíme byť mimoriadne opatrní. Bradfordov test tu nemusí byť najlepšou voľbou kvôli jeho špecifickému zloženiu aminokyselín, takže sa viac spoliehame na HPLC a UV - Vis spektroskopiu.
A potom je tuMazdutide (Lys20(N3-CH2CO-)). Toto je komplexnejší peptid a používame viackrokový prístup. Začneme s UV - Vis, aby sme získali počiatočný údaj, potom pomocou HPLC ho oddelíme od akýchkoľvek nečistôt a získame presnejšiu kvantifikáciu.
V našej spoločnosti je kontrola kvality veľkým problémom. Pri kvantifikácii našich katalógových peptidov dbáme na dodržiavanie prísnych protokolov. Na každej šarži vykonávame viacero testov a naše výsledky porovnávame s certifikovanými referenčnými materiálmi, aby sme zaistili presnosť. Tiež vedieme podrobné záznamy o všetkých kvantifikačných údajoch, takže naši zákazníci môžu mať plnú dôveru v peptidy, ktoré kupujú.
Ak hľadáte vysokokvalitné katalógové peptidy a potrebujete presnú kvantifikáciu, sme tu, aby sme vám pomohli. Či už ste výskumník, ktorý hľadá peptidy pre svoj ďalší veľký experiment, alebo farmaceutická spoločnosť vyvíjajúca nový liek, máme peptidy, ktoré potrebujete. Náš tím odborníkov je vždy k dispozícii, aby odpovedal na akékoľvek otázky, ktoré by ste mohli mať o našich produktoch alebo procese kvantifikácie. Neváhajte teda osloviť a začať konverzáciu o vašich potrebách peptidov. Sme pripravení s vami spolupracovať pri hľadaní najlepších riešení pre vaše projekty.
Referencie
- Scopes, RK (1994). Purifikácia proteínov: princípy a prax. Springer.
- Skoog, DA, West, DM, Holler, FJ, & Crouch, SR (2013). Základy analytickej chémie. Cengage Learning.
- Bollag, DM, Rozycki, MD, & Edelstein, SJ (1996). Proteínové metódy. wiley - liss.