Rozpustenie katalógových peptidov je rozhodujúcim krokom v mnohých biochemických a biofyzikálnych experimentoch. Ako dodávateľ vysoko kvalitných katalógových peptidov chápeme výzvy a dôležitosť správneho rozpustenia peptidu. V tomto blogu preskúmame kľúčové faktory a metódy efektívneho rozpustenia katalógových peptidov.
Pochopenie charakteristík peptidu
Pred pokusom o rozpustenie peptidu je nevyhnutné porozumieť jeho fyzikálnym a chemickým vlastnostiam. Peptidy sa môžu značne meniť, pokiaľ ide o ich aminokyselinové zloženie, dĺžku, hydrofóbnosť a náboj. Tieto charakteristiky významne ovplyvňujú rozpustnosť peptidu.
Hydrofóbne peptidy, ktoré obsahujú vysoký podiel ne -polárnych aminokyselín, ako je leucín, izoleucín a fenylalanín, sa vo vodných roztokoch často ťažko rozpúšťajú. Na druhej strane hydrofilné peptidy s polárnymi alebo nabitými aminokyselinami ako lyzín, arginín a kyselina glutámová majú tendenciu byť rozpustnejšie vo vode.
NapríkladOsteokalcín (7 - 19) (človek)je relatívne krátky peptid. Jeho rozpustnosť závisí od špecifických zvyškov aminokyselín, ktoré obsahuje. Ak má významný počet hydrofóbnych zvyškov, môže si vyžadovať špeciálne rozpúšťadlá na rozpustenie.
Výber rozpúšťadla
Výber rozpúšťadla je jedným z najdôležitejších faktorov rozpúšťania peptidu. Tu je niekoľko bežných rozpúšťadiel používaných na rozpustenie peptidu:
Vodné rozpúšťadlá
- Vodná voda: Čistá voda je najjednoduchším a najbežnejším rozpúšťadlom pre hydrofilné peptidy. Ak má peptid pri fyziologickom pH čistý pozitívny alebo negatívny náboj, môže sa často ľahko rozpustiť vo vode. Napríklad peptidy s vysokým obsahom základných aminokyselín (napr. Lyzín a arginín) sa budú pozitívne nabitý pri neutrálnom pH a môžu tvoriť iónové interakcie s molekulami vody, čo uľahčuje rozpustenie.
- Vyrovnávacie riešenia: Roztokové roztoky sa často používajú na udržanie konkrétneho prostredia pH. Rôzne peptidy môžu mať optimálnu rozpustnosť pri rôznych hodnotách pH. Napríklad kyslé peptidy sa môžu rozpúšťať lepšie v mierne základných pufrach, zatiaľ čo základné peptidy môžu byť rozpustnejšie v kyslých pufrach. Fosfátový roztokový soľný roztok (PBS) je široko používaný tlmivý roztok v biologickom výskume. Poskytuje fyziologickú pH a iónovú pevnosť, ktorá je vhodná pre mnoho peptidov, ktoré sa budú používať v biologických testoch.
Organické rozpúšťadlá
- Dimetylsulfoxid (DMSO): DMSO je vysoko polárne organické rozpúšťadlo, ktoré môže rozpustiť širokú škálu peptidov vrátane hydrofóbnych. Má schopnosť rozdeliť hydrofóbne interakcie medzi molekulami peptidu. DMSO je však toxický pre bunky pri vysokých koncentráciách, takže ak je peptid určený pre testy na báze buniek, koncentrácia DMSO v konečnom roztoku je potrebné starostlivo kontrolovať.
- Acetonitril: Acetonitril je ďalším bežným organickým rozpúšťadlom používaným pri rozpúšťaní peptidu. Často sa používa v kombinácii s vodou v reverznej - fázovej vysoko výkonnej kvapalnej chromatografii (RP - HPLC) na čistenie a analýzu peptidu. Acetonitril môže narušiť hydrofóbne interakcie v peptidoch a je užitočný na rozpúšťanie mierne hydrofóbnych peptidov.
PreRukatazín, ktoré môžu mať niektoré hydrofóbne oblasti, zmes vody a malé množstvo DMSO alebo acetonitrilu môžu byť dobrou voľbou pre rozpustenie.
Techniky rozpúšťania
Po výbere príslušného rozpúšťadla sa na rozpustenie peptidu môžu použiť nasledujúce techniky:
Mierne miešanie
Jemne vírenie alebo pipetovanie zmesi peptidu - rozpúšťadla môže pomôcť rozptýliť peptidové častice a podporovať rozpustenie. Táto metóda je vhodná pre peptidy, ktoré sú relatívne rozpustné. Napríklad krátky hydrofilný peptid sa môže v priebehu niekoľkých minút jemného miešania úplne rozpustiť.
Sonikácia
Sonikácia zahŕňa aplikovanie ultrazvukových vĺn na zmes peptidu - rozpúšťadla. Vysoko energetické vlny môžu rozbiť peptidové agregáty a zvýšiť povrchovú plochu peptidu v kontakte s rozpúšťadlom, čím sa zrýchľuje rozpustenie. Sonikácia však môže vytvárať teplo, ktoré môže spôsobiť degradáciu alebo oxidáciu peptidu. Preto je dôležité kontrolovať čas a teplotu sonikácie. Napríklad Sonikácia by sa mala vykonávať v krátkych výbuchoch s intervalmi, aby sa umožnila ochladenie vzorky.
Ohrievanie
Zahrievanie môže zvýšiť kinetickú energiu molekúl peptidu a rozpúšťadla, čo podporuje rozpustenie. Táto metóda by sa však mala používať opatrne, pretože vysoké teploty môžu peptid denaturovať. U niektorých peptidov môže byť mierne zahrievanie (napr. 37 ° C) na krátke obdobie dostatočné na ich rozpustenie bez toho, aby spôsobilo značné poškodenie.
Riešenie problémov
Niekedy, dokonca aj so správnymi technikami rozpúšťadla a rozpúšťania, sa peptidy stále úplne nerozpúšťajú. Tu je niekoľko možných dôvodov a riešení:
Agregácia peptidu
Peptidy môžu tvoriť agregáty v dôsledku hydrofóbnych interakcií, elektrostatických interakcií alebo vodíkovej väzby. Ak existuje podozrenie na agregáciu, pridanie malého množstva chaotropického činidla, ako je močovina alebo guanidín hydrochlorid, môže pomôcť rozbiť agregáty. Tieto látky však môžu ovplyvniť aj biologickú aktivitu peptidu, takže by sa mali používať opatrne.
Nesprávny výber rozpúšťadla
Ak sa peptid nerozpustí v pôvodne zvolenom rozpúšťadle, vyskúšajte iné rozpúšťadlo alebo zmes rozpúšťadiel. Napríklad, ak je peptid nerozpustný vo vode, skúste pridať do vody malé množstvo DMSO alebo acetonitrilu.
Kontaminácia
Kontaminácia peptidu alebo rozpúšťadla môže tiež ovplyvniť rozpustenie. Uistite sa, že všetky vybavenie a rozpúšťadlá sú čisté a bez nečistôt.
Prípadová štúdia:Biotinyl - pankreatický polypeptid (ľudský)
PoďmeBiotinyl - pankreatický polypeptid (ľudský)ako príklad. Tento peptid má pripojenú skupinu biotínu, ktorá môže ovplyvniť jeho rozpustnosť. Ak ide o hydrofilný peptid, môže sa dobre rozpustiť vo vode alebo pufrovanom roztoku. Ak však proces biotinylácie zaviedol niektoré hydrofóbne charakteristiky, môže na úplné rozpustenie vyžadovať malé množstvo organického rozpúšťadla, ako je DMSO.
Najprv sa môžeme pokúsiť rozpustiť vo vode jemným miešaním. Ak sa úplne nerozpustí, môžeme pridať malý objem DMSO (napr. 1 - 5% obj./obj.) A naďalej sa miešať. Sonikácia sa môže použiť aj na pomoc procesu rozpúšťania, ale musíme monitorovať teplotu, aby sme zabránili poškodeniu peptidu.
Záver
Rozpustenie katalógových peptidov je komplexný proces, ktorý si vyžaduje dôkladné zváženie charakteristík peptidu, výberu rozpúšťadla a techník rozpúšťania. Pochopením týchto faktorov a dodržiavaním vhodných postupov môžeme zabezpečiť, aby sa peptidy rozpustili efektívne a zachovali si svoju biologickú aktivitu.
Ako popredný dodávateľ katalógových peptidov sme zaviazaní poskytovať výrobky vysokej kvality a profesionálnu technickú podporu. Ak máte akékoľvek otázky týkajúce sa rozpustenia peptidu alebo potrebujete kúpiť naše katalógové peptidy, neváhajte nás kontaktovať a požiadajte o ďalšiu diskusiu. Tešíme sa na spoluprácu s vami na uspokojení vašich výskumných potrieb.
Odkazy
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2002). Molekulárna biológia bunky. Garland Science.
- Hermanson, GT (2013). Techniky biokonjugátu. Akademická tlač.
- Snyder, LR, Kirkland, JJ a Dolan, JW (2010). Úvod do modernej kvapalinovej chromatografie. Wiley.