Hej! Ako dodávateľ katalógových peptidov som sa zaoberal mnohými klientmi, ktorí čelia výzvam súvisiacim s rozpustnosťou peptidov. Je to bežná bolesť hlavy, ale nebojte sa, som tu, aby som sa podelil o niekoľko tipov, ako optimalizovať rozpustnosť katalógových peptidov.
Po prvé, pochopme, prečo záleží na rozpustnosti. Peptidy sa používajú v širokej škále aplikácií, od výskumu po terapeutický vývoj. Ak sa peptid nerozpustí správne, môže pokaziť vaše experimenty alebo liečby. Napríklad v štúdiách bunkovej kultúry nemusia slabo rozpustné peptidy efektívne dosiahnuť cieľové bunky, čo vedie k nepresným výsledkom.
Faktory ovplyvňujúce rozpustnosť peptidu
Predtým, ako sa ponoríme do riešení, pozrime sa na faktory, ktoré ovplyvňujú rozpustnosť peptidu. Jedným z hlavných faktorov je zloženie aminokyselín. Peptidy bohaté na hydrofóbne aminokyseliny, ako je leucín, izoleucín a valín, majú tendenciu byť menej rozpustné vo vode. Na druhej strane, peptidy s vysokým obsahom hydrofilných aminokyselín, ako je lyzín, arginín a kyselina glutámová, sú rozpustnejšie.
Ďalším faktorom je dĺžka peptidu. Všeobecne sú dlhšie peptidy menej rozpustné ako kratšie. Je to preto, že dlhšie peptidy majú viac hydrofóbnych oblastí a je pravdepodobnejšie, že tvoria agregáty.
PH roztoku tiež hrá rozhodujúcu úlohu. Peptidy majú izoelektrický bod (PI), čo je pH, pri ktorom majú čistý náboj nula. V PI sú peptidy najmenej rozpustné a majú tendenciu zrážať sa. Upravenie pH preč od Pi môže zlepšiť rozpustnosť.
Stratégie na optimalizáciu rozpustnosti peptidu
1. Vyberte správne rozpúšťadlo
Voda je často prvou voľbou pre rozpustenie peptidov, ale nemusí fungovať pre všetky peptidy. Pre hydrofóbne peptidy sa môžu použiť organické rozpúšťadlá, ako je dimetylsulfoxid (DMSO) alebo acetonitril. Pri používaní organických rozpúšťadiel však buďte opatrní, pretože môžu byť toxické pre bunky a môžu ovplyvniť aktivitu peptidu. Je dobré začať s malým množstvom organického rozpúšťadla a potom ho zriediť vodou.
Napríklad, ak pracujete s hydrofóbnym peptidom akoLátka P (9-11), môžete ho skúsiť najskôr rozpustiť v malom objeme DMSO a potom ho zriediť vodou do požadovanej koncentrácie.
2. Upravte pH
Ako už bolo spomenuté vyššie, úpravu pH môže významne zlepšiť rozpustnosť peptidu. Na riadenie pH môžete použiť vyrovnávacie pamäte. Pre kyslé peptidy použite na zvýšenie pH základný pufer, ako je hydroxid sodný (NaOH). V prípade základných peptidov použite na zníženie pH kyslý pufor kyseliny chlorovodíkovej (HCI).
Pri úprave pH je dôležité to urobiť postupne a monitorovať rozpustnosť. Môžete použiť pH meter na zabezpečenie toho, aby pH bolo v požadovanom rozsahu.
3. Používajte detergenty
Detergenty môžu pomôcť solubilizovať hydrofóbne peptidy znížením povrchového napätia a zabránením agregácie peptidu. Bežné detergenty používané na peptidovú solubilizáciu zahŕňajú Tween 20, Triton X-100 a SDS. Uvedomte si však, že detergenty môžu tiež ovplyvniť aktivitu peptidu a môžu narušiť niektoré testy. Používajte ich opatrne a optimalizujte koncentráciu.
4. Sonikácia
Sonikácia je technika, ktorá využíva vysokofrekvenčné zvukové vlny na rozbitie agregátov peptidov a zlepšenie rozpustnosti. Sonikátor môžete použiť na sonikáciu peptidového roztoku na krátku dobu. Dávajte však pozor na to, aby ste nezamonšovali, pretože to môže poškodiť peptid.
5. Pridajte chaotropické látky
Chaotropné látky ako močovina a guanidín hydrochlorid môžu narušiť nekovalentné interakcie medzi peptidovými molekulami a zlepšiť rozpustnosť. Pracujú tým, že denaturujú štruktúru peptidov a zabránia agregácii. Rovnako ako detergenty však môžu chaotropné látky ovplyvniť aj aktivitu peptidu, takže ich používajte iba v prípade potreby.
Prípadové štúdie
Pozrime sa na niektoré príklady optimalizácie rozpustnosti peptidu v reálnom svete.
Prípad 1:Matrixový proteín M1 (58-66) (vírus chrípky A)
Klient mal problémy s rozpúšťaním tohto peptidu vo vode. Peptid bol bohatý na hydrofóbne aminokyseliny, a preto sme odporučili začať s malým objemom DMSO. Upravili sme tiež pH na 8.0 pomocou vyrovnávacej pamäte TRIS. Po 5 minútach sa peptid úplne rozpustil.
Prípad 2:Analytik A (1-9)
Tento peptid bol relatívne rozpustný vo vode, ale klient chcel zvýšiť rozpustnosť pre konkrétny experiment. Navrhli sme pridanie malého množstva Tween 20 (0,1%) do roztoku. To pomohlo zabrániť agregácii peptidov a zlepšilo rozpustnosť.
Záver
Optimalizácia rozpustnosti katalógových peptidov je rozhodujúca pre ich úspešné použitie v rôznych aplikáciách. Pochopením faktorov, ktoré ovplyvňujú rozpustnosť a používajú správne stratégie, môžete zabezpečiť, aby sa vaše peptidy správne rozpustili a vykonávali podľa očakávania.
Ak máte stále problémy s rozpustnosťou peptidov alebo máte nejaké ďalšie otázky týkajúce sa našich katalógových peptidov, neváhajte osloviť. Sme tu, aby sme vám pomohli nájsť najlepšie riešenia pre vaše výskumné alebo vývojové potreby. Či už ste výskumný pracovník v laboratóriu alebo vývojár pracujúci na novom terapeutike, môžeme vám poskytnúť vysoko kvalitné peptidy a odborné rady. Začnime teda konverzáciu a uvidíme, ako môžeme spolupracovať na dosiahnutí vašich cieľov.
Odkazy
- Goodman, M., a kol. (2003). "Biosyntéza peptidov a proteínov." V komplexnej chéme prírodných produktov, roč. 2, str. 1-37.
- Wade, JD, & Tregear, GW (1993). "Syntéza a dizajn peptidov." V metódach v Enzymology, zv. 221, str. 1-61.
- Fields, GB, & Noble, RL (1990). „Syntéza peptidov v pevnej fáze využívajúca 9-fluorenylmetoxycarbonyl aminokyseliny.“ International Journal of Peptid a Protein Research, 35 (3), 161-214.