Peptidové aktívne farmaceutické zložky (API) zohrávajú v modernej medicíne rozhodujúcu úlohu a ponúkajú cielené a efektívne možnosti liečby pre širokú škálu chorôb. Ako popredný dodávateľ API peptidov chápeme dôležitosť výroby vysokokvalitných peptidov, ktoré spĺňajú najprísnejšie regulačné normy. Jedným z kľúčových krokov vo výrobe peptidových API je čistenie, ktoré zaisťuje odstránenie nečistôt a kontaminantov na dosiahnutie požadovanej úrovne čistoty a kvality. V tomto blogovom príspevku budeme diskutovať o krokoch spojených s čistením peptidových rozhraní API.
Krok 1: Syntéza surového peptidu
Prvým krokom pri čistení peptidových API je syntéza surového peptidu. Typicky sa to robí pomocou syntézy peptidov v tuhej fáze (SPP), čo je široko používaná metóda na chemickú syntézu peptidov. V SPP je peptid postavený na jednej aminokyseline naraz na pevnej podpere, zvyčajne živice. Aminokyseliny sú chránené špecifickými skupinami, aby sa zabránilo nechceným reakciám počas procesu syntézy. Akonáhle je peptidový reťazec zostavený, je štiepený zo živicovej a deproted, aby sa získal surové peptid.
Krok 2: Počiatočná filtrácia
Po syntéze surovej peptidu obsahuje reakčná zmes požadovaný peptid, ako aj rôzne nečistoty, ako sú nezreagované aminokyseliny, spojovacie činidlá a fragmenty živice. Prvým krokom čistenia je odstránenie týchto veľkých častíc a nerozpustných nečistôt prostredníctvom filtrácie. Jednoduchý proces filtrácie s použitím filtračného papiera alebo membránového filtra môže účinne odstrániť viditeľné častice, pričom zostane relatívne jasný roztok obsahujúci surový peptid.
Krok 3: Preparatívna chromatografia
Preparatívna chromatografia je kľúčovým krokom pri čistení peptidových API. Používa sa na oddelenie požadovaného peptidu od zostávajúcich nečistôt na základe ich rôznych fyzikálnych a chemických vlastností. Existuje niekoľko typov chromatografických techník, ktoré sa môžu použiť na čistenie peptidov, vrátane chromatografie reverznej fázy (RPC), chromatografie výmeny iónov (IEC) a chromatografie exklúznej veľkosti (SEC).
- Chromatografia s reverznou fázou (RPC): RPC je najbežnejšie používaná chromatografická technika na čistenie peptidu. Je založený na hydrofóbnych interakciách medzi peptidom a stacionárnou fázou, ktorá je zvyčajne hydrofóbnou živicou. Surový peptidový roztok sa naloží na kolón RPC a peptidy sa eluujú pomocou gradientu polárneho rozpúšťadla (ako je voda) a nepolárneho rozpúšťadla (ako je acetonitril). Peptidy s rôznymi hydrofóbnosťmi sa budú eluovať v rôznych časoch, čo umožní ich oddelenie. Napríklad peptid akoRiadenieMôže sa efektívne čistiť pomocou RPC.
- Iónová chromatografia (IEC): IEC oddeľuje peptidy na základe ich náboja. Stacionárna fáza v IEC je živica s nabitými funkčnými skupinami, buď katiónom alebo aniónom. Surový peptidový roztok sa načíta na kolóne IEC a peptidy sa eluujú pomocou gradientu pufra s rôznymi iónovými pevnosťami alebo hodnotami pH. Peptidy s rôznymi nábojmi sa viažu na živicu s rôznymi afinitami a v rôznych časoch sa eluujú.
- Chromatografia vylúčenia veľkosti (SEC): SEC oddeľuje peptidy na základe ich veľkosti. Stacionárna fáza v SEC je pórovitá živica a peptidy sú oddelené podľa ich schopnosti vstúpiť do pórov živice. Väčšie peptidy sa budú eluovať ako prvé, nasledované menšími peptidmi. SEC sa často používa ako leštiaci krok po RPC alebo IEC na odstránenie zostávajúcich agregátov alebo nečistoty s nízkou molekulovou hmotnosťou.
Krok 4: Odpočenie
Po prípravnej chromatografii môžu purifikované peptidové frakcie obsahovať soli a iné malé molekuly z chromatografických pufrov. Opakovanie je proces odstránenia týchto solí, aby sa získal čistý peptidový roztok. Jednou z bežných metód odsoľovania je dialýza, kde sa peptidový roztok umiestnil do dialyzačného vrecka s poloprodukovateľným membránom a dialyzovaný proti pufru s nízkou koncentráciou soli. Ďalšou metódou je gélová filtračná chromatografia, ktorá môže oddeliť peptid od solí na základe rozdielov ich veľkosti.
Krok 5: Lyofilizácia
Lyofilizácia, známa tiež ako sušenie zmrazenia, je posledným krokom v procese čistenia. Zahŕňa zmrazenie vyčisteného roztoku peptidu a potom odstránenie vody sublimáciou vo vákuu. Lyofilizácia nielen odstraňuje vodu z peptidového roztoku, ale stabilizuje aj peptid zabránením degradácie a mikrobiálneho rastu. Výsledný lyofilizovaný peptid je suchý prášok, ktorý sa dá ľahko skladovať a prepravovať.
Krok 6: Kontrola kvality
Kontrola kvality je nevyhnutnou súčasťou procesu čistenia API peptidu. Po purifikácii a lyofilizácii sa peptid analyzuje pomocou rôznych analytických techník, aby sa zabezpečila jeho čistota, identita a kvalita. Niektoré z bežných analytických techník používaných na kontrolu kvality peptidu zahŕňajú vysoko výkonnú kvapalinovú chromatografiu (HPLC), hmotnostnú spektrometriu (MS), nukleárnu magnetickú rezonanciu (NMR) a analýzu aminokyselín.
- Vysoko výkonná kvapalná chromatografia (HPLC): HPLC sa používa na stanovenie čistoty peptidu oddelením peptidu od zostávajúcich nečistôt a kvantifikáciou ich množstiev. Dobre purifikovaný peptid by mal mať na chromatograme HPLC jediný ostrý pík, čo naznačuje vysokú úroveň čistoty.
- Hmotnostná spektrometria (MS): MS sa používa na potvrdenie identity peptidu stanovením jeho molekulovej hmotnosti. Nameraná molekulová hmotnosť peptidu by sa mala zhodovať s teoretickou molekulovou hmotnosťou vypočítanou z jeho aminokyselinovej sekvencie.
- Jadrová magnetická rezonancia (NMR): NMR sa používa na stanovenie štruktúry a konformácie peptidu. Môže poskytovať informácie o chemickom prostredí aminokyselinových zvyškov v peptide a pomôcť potvrdiť jeho identitu.
- Aminokyselinová analýza: Aminokyselinová analýza sa používa na stanovenie aminokyselinového zloženia peptidu. Namerané zloženie aminokyselín by sa malo zhodovať s očakávaným zložením na základe peptidovej sekvencie.
Krok 7: Balenie a úložisko
Akonáhle sa API peptidu prešlo testmi na kontrolu kvality, je pripravený na balenie a skladovanie. Peptid je typicky balený do sterilných liekoviek alebo ampulkov pod dusíkovou alebo argónovou atmosférou, aby sa zabránilo oxidácii a degradácii. Balené materiály by sa mali zvoliť tak, aby boli kompatibilné s peptidom a poskytli dobrú bariéru proti vlhkosti, kyslíku a svetle. Podmienky skladovania pre peptidové API závisia od jeho stability a mali by sa starostlivo kontrolovať, aby sa zabezpečila jeho dlhodobá kvalita.
Ako dodávateľ peptidov API sa zaväzujeme poskytovať našim zákazníkom vysoko kvalitné peptidové API, ktoré spĺňajú ich špecifické požiadavky. Naše najmodernejšie zariadenia na čistenie a skúsený tím vedcov zabezpečujú, že každá dávka API peptidov je očistená podľa najvyšších štandardov. Ak máte záujem o nákup peptidových rozhraní API, ako napríkladPalmitoyl -glu (OSU) -OTBUaleboFMOC-SER (TBU) -AIB-OH, Neváhajte a kontaktujte nás pre viac informácií a prediskutujte svoje konkrétne potreby. Tešíme sa na spoluprácu s vami na poskytnutí najlepších riešení API peptidov pre váš farmaceutický výskum a vývoj.
Odkazy
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2002). Molekulárna biológia bunky. Garland Science.
- Jones, J. (1991). Syntéza aminokyselín a peptidu. Oxford University Press.
- Snyder, LR, Kirkland, JJ a Glajch, JL (2010). Praktický vývoj metód HPLC. John Wiley & Sons.