Biotínové peptidy

Čo sú biotinylované peptidy?

Biotinylované peptidy sú peptidy, ktoré boli modifikované tak, aby zahŕňali biotínovú skupinu. Táto modifikácia využíva vysoko{1}}afinitnú interakciu medzi biotínom a avidínom alebo streptavidínom, ktorá sa široko používa v biologických a biochemických aplikáciách. Molekula biotínu je malá, stabilná a významne nemení štruktúru ani funkciu peptidu, pričom umožňuje vysoko účinné zachytenie alebo detekciu prostredníctvom systémov založených na avidíne-.

 

Chemická modifikácia
Biotín sa zvyčajne zavádza prostredníctvom NHS-biotínového (N-hydroxysukcínimid biotín) činidla, ktoré reaguje s primárnymi amínovými skupinami nachádzajúcimi sa na N{2}}konci peptidu alebo lyzínovými zvyškami, pričom vytvára stabilnú amidovú väzbu.

生物素（Biotín） 肽（Peptid）

COOH NH2

| |

+---EDC/NHS---→ 活化羧基（Aktivácia） → 缩合（Spojenie）

↓ ↓

Biotín-CONH-peptid

 

Afinitná interakcia
Biotinylovaný peptid sa môže silne viazať (Kd ~10⁻15M) na avidín alebo streptavidín, čo ho robí ideálnym na použitie v testoch, ktoré vyžadujú presnú detekciu, zachytenie alebo imobilizáciu.

Prípady syntézy biotinylovaných peptidov

Peptidová sekvencia: biotín-Ahx-YXXXXXRXRRR-NH2

Dĺžka: 11A

Purity: >95%

M.W: 1898.32

Peptidová sekvencia: biotín-YXXXXXRXRRR--ERXXXDLXXXXPVXXXXPRR

Dĺžka: 31A

Purity: >95%

M.W: 4145.89

 

Aplikácie biotinylovaných peptidov

Biotinylované peptidy sú všestranné nástroje vo výskume a priemysle so širokou škálou aplikácií, vrátane:

Afinitná purifikácia

Používa sa na čistenie väzbových partnerov, ako sú proteíny, protilátky alebo nukleové kyseliny, imobilizáciou biotinylovaného peptidu na streptavidínových guľôčkach.

ELISA a Western blotting

Biotinylované peptidy fungujú ako sondy na zisťovanie špecifických interakcií, keď sú spojené s avidín{0}}HRP alebo avidín{1}}fluorescenčnými značkami.

Povrchová plazmónová rezonancia (SPR)

Používa sa na imobilizáciu peptidov na biosenzorových čipoch pre interakčné štúdie.

Objav drog

Skríning liekových kandidátov analýzou ich väzby na biotinylované peptidové ciele.

Imunológia

Biotinylované peptidy sa používajú na mapovanie epitopov, štúdium interakcií antigénov -protilátok a vykonávanie testov na T-bunkách.

Mapovanie epitopov pre vývoj vakcín

Vlastný biotinylovaný peptid sa použil na identifikáciu antigénnych epitopov vírusového proteínu, čo pomohlo navrhnúť kandidáta na vakcínu.

Štúdie interakcie proteínov-

Biotinylované peptidy imobilizované na streptavidínom -potiahnutých platniach umožnili štúdium interakcií receptorových-ligandov a odhalili väzbové afinity kritické pre vývoj lieku.

Optimalizácia imunoanalýzy

V diagnostickom teste sa biotinylované peptidy použili ako antigény na zlepšenie citlivosti a špecifickosti testu ELISA na detekciu biomarkerov ochorenia.

 

Referencie

1. Green, NM (1975).Avidín a streptavidín.Biochemical Journal, 131(3), 781-791.

2. Chaiet, L. a Wolf, FJ (1964).Vlastnosti streptavidínu, proteínu viažuceho biotín -produkovaného Streptomyces.Archives of Biochemistry and Biophysics, 106(1), 1-5.

3. Finn, FM, & Titus, G. (1994).Biotinylácia proteínov vo výskume a biotechnológii.Anal Biochem, 218(1), 1-7.